新型混合模式介質(zhì)制備及牛初乳免疫球蛋白分離研究.pdf

1、混合模式層析是一種新型的生物分離方法，其功能配基兼具多種相互作用模式，吸附容量大，選擇性高，洗脫條件溫和。本文結(jié)合親硫?qū)游龊褪杷噪姾烧T導(dǎo)層析，篩選新型混合模式配基，制備新介質(zhì)，并用于牛初乳免疫球蛋白的分離純化。親硫?qū)游鰧?duì)免疫球蛋白的特異性吸附需借助高鹽濃度實(shí)現(xiàn)，而疏水性電荷誘導(dǎo)層析具有非鹽依賴的吸附特性，本文結(jié)合兩者優(yōu)點(diǎn)，新型配基兼具親硫作用、疏水作用和靜電作用，在高鹽和低鹽條件下都可以高效吸附免疫球蛋白，且吸附能力隨pH改變呈顯著變

2、化，可以實(shí)現(xiàn)高效洗脫。本文研究包括介質(zhì)制備、吸附性能測(cè)定和牛初乳免疫球蛋白分離三部分。
　　以Bestarose4FF瓊脂糖凝膠微球?yàn)榛|(zhì)，經(jīng)二乙烯基砜活化，偶聯(lián)4-巰基乙基吡啶、2-巰基咪唑、2-巰基-1-甲基咪唑和3-巰基-1，2，4-三氮唑等4種配基，制備了新型混合模式介質(zhì)，分別命名為Bestarose-DVS-MEP、Bestarose-DVS-MI、Bestarose-DVS-MMI和Bestarose-DVS-MTI。

3、優(yōu)化了基質(zhì)活化和配基偶聯(lián)的反應(yīng)條件，配基密度約為60～70μmol/ml基質(zhì)，偶聯(lián)效率約60％。
　　考察了新型混合模式介質(zhì)對(duì)牛初乳免疫球蛋白的靜態(tài)吸附性能和吸附動(dòng)力學(xué)。結(jié)果表明，4種新介質(zhì)具有吸附容量大和非鹽依賴性吸附的特點(diǎn)，增加硫酸鹽濃度能加快吸附過(guò)程，且對(duì)吸附量影響較小。Bestarose-DVS-MEP、Bestarose-DVS-MI和Bestarose-DVS-MMI對(duì)pH敏感，pH7吸附容量高，pH4可實(shí)現(xiàn)牛初乳免疫

4、球蛋白的解吸。
　　新型混合模式層析從牛初乳蛋白粉溶液中分離免疫球蛋白。比較了不同介質(zhì)的分離效果，發(fā)現(xiàn)Bestarose-DVS-MI是最合適的介質(zhì)。進(jìn)一步優(yōu)化了層析分離條件，選擇pH7進(jìn)樣，pH4洗脫，進(jìn)樣濃度25 mg/ml，進(jìn)樣量1ml，牛初乳免疫球蛋白純度達(dá)95％，純化因子為6.2，收率約64.2％。
　　本文篩選出2-巰基咪唑作為混合模式新配基，制備了新型混合模式介質(zhì)，用于分離牛初乳免疫球蛋白，取得了較好的結(jié)果，為