頭孢菌素C生產(chǎn)菌頂頭孢霉HC-4原生質(zhì)體誘變選育的研究.pdf

1、頭孢菌素C是由頂頭孢霉菌產(chǎn)生的一種β-內(nèi)酰胺類抗生素,其母核7-氨基頭孢烷酸是半合成β-內(nèi)酰胺類抗生素的重要中間體之一。它在抗生素藥物中所占比例逐年上升。半合成頭孢類抗生素由于其抗菌譜廣和過敏性弱的特點(diǎn),是臨床上廣泛使用的消炎、抗菌藥物。因此生產(chǎn)規(guī)模的擴(kuò)大和生產(chǎn)水平的提高是各大制藥公司競(jìng)相追求的目標(biāo)。菌種的誘變選育為發(fā)酵工業(yè)提高產(chǎn)量做出了突出貢獻(xiàn)。原生質(zhì)體誘變技術(shù)作為一種行之有效的育種方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于微生物菌種的選育中。
　　

2、 本文以頂頭孢霉HC-4為出發(fā)菌株,對(duì)HC-4的原生質(zhì)體進(jìn)行氯化鋰.紫外線誘變、微波誘變以獲得高產(chǎn)菌株,得到了如下結(jié)果:
　　 (1)利用酶解法制備頂頭孢霉HC-4原生質(zhì)體并對(duì)原生質(zhì)體再生率進(jìn)行了考察。取菌齡為120 h的菌絲體,采用1％蝸牛酶和1％纖維素酶混合酶液,酶解溫度為30℃,50 r·min-1搖床旋轉(zhuǎn),酶解3.5 h。以KC溶液作為滲透壓穩(wěn)定劑。制備得到的原生質(zhì)體濃度為4.62×107個(gè)／mL。涂布于原生質(zhì)體再生平板

3、,原生質(zhì)體再生率達(dá)到10.18％。
　　 (2)對(duì)氯化鋰-紫外線、微波兩種誘變方法的誘變參數(shù)及誘變效果進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)氯化鋰-紫外線誘變效果優(yōu)于微波。氯化鋰濃度為0.50％、紫外線照射時(shí)間為30 s或60 s時(shí)誘變效果最好,正突變率達(dá)到了50.00％。
　　 (3)對(duì)頂頭孢霉HC-4的原生質(zhì)體進(jìn)行氯化鋰.紫外線誘變、微波誘變,得到121株突變株(其中氯化鋰-紫外線誘變得到61株,微波誘變得到60株)。以金黃色葡萄球菌作為指

4、示菌,利用濾紙片擴(kuò)散法進(jìn)行篩選,得到45株正突變株,76株負(fù)突變株。挑選出13株抑菌活性較高的正突變株進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性考察,其中大部分正突變株傳代后抑菌能力大幅下降。正突變株ZW3-17遺傳性狀穩(wěn)定,連續(xù)傳代五次之后,其發(fā)酵液抑菌圈面積與出發(fā)菌株HC-4的發(fā)酵液抑菌圈面積的比值分別為R1:1.314209,R2:1.317152,R3:1.084906,R4:1.200840,R5:1.309286。利用高效液相色譜法測(cè)定正突變株ZW3-