磁性免疫層析定量技術(shù)檢測(cè)癌胚抗原的應(yīng)用研究.pdf

1、背景:
　　近年來，全球癌癥發(fā)病率和死亡率不斷上升，癌癥已成為人類死亡的首要原因。隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，其診療水平顯著提高，但仍不能滿足人類和臨床的需要。許多研究表明，腫瘤標(biāo)記物在腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、臨床分期、評(píng)價(jià)療效和預(yù)后等方面具有重要意義。早期、便捷、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)人血液中腫瘤標(biāo)記物的含量，便于及時(shí)發(fā)現(xiàn)腫瘤患者和對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)母深A(yù)，有利于改善預(yù)后。目前腫瘤標(biāo)記物的臨床檢測(cè)大多依靠中心實(shí)驗(yàn)室，需要專業(yè)人員操作和大型

2、儀器，樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間較長而且費(fèi)用偏高，不利于腫瘤標(biāo)記物的時(shí)實(shí)監(jiān)測(cè)。
　　上世紀(jì)末逐步發(fā)展起來的側(cè)流免疫層析試紙條是一種具有準(zhǔn)確、快速、便捷、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)的新型快速免疫檢測(cè)技術(shù)，可以在床邊或者采樣現(xiàn)場進(jìn)行檢測(cè)，已被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、療效監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域中生物標(biāo)記物的檢測(cè)。然而基于膠體金等標(biāo)記物的光學(xué)免疫層析檢測(cè)技術(shù)只能定性或者半定量檢測(cè)，而且檢測(cè)的靈敏度和一致性較低。近年來，基于磁性納米材料的磁信號(hào)檢測(cè)成為免疫層析定量檢測(cè)技術(shù)的研究熱點(diǎn)。<

3、br>　　目的:
　　建立以超順磁性納米微球?yàn)闃?biāo)記物的磁性側(cè)流免疫層析試紙條檢測(cè)體系，可用于早期、快速、準(zhǔn)確、便捷的檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物癌胚抗原。
　　方法:
　　1.采用EDC/NHS活化法在羧基官能團(tuán)修飾的磁性納米微球表面偶聯(lián)抗體制備免疫磁珠并通過掃描電子顯微鏡、紅外光譜檢測(cè)儀及BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒進(jìn)行表征。
　　2.優(yōu)化免疫磁珠的制備體系和磁性免疫層析試紙條的各個(gè)組成部分，構(gòu)建用于檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物CEA的磁性免

4、疫層析試紙條，并對(duì)其性能進(jìn)行測(cè)定。
　　3.用創(chuàng)建的本檢測(cè)體系和臨床常用的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)120例臨床血清樣本，對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，進(jìn)一步驗(yàn)證該檢測(cè)體系的應(yīng)用價(jià)值。
　　4.對(duì)臨床樣本檢測(cè)結(jié)果使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，運(yùn)用t檢驗(yàn)、相關(guān)性分析和x2檢驗(yàn)分析該檢測(cè)體系的精確性。取檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.采用EDC/NHS活化法制備的免疫磁性納米微球粒徑均一、分散性良好，性能穩(wěn)定

5、，適于免疫層析系統(tǒng)的構(gòu)建。
　　2.構(gòu)建該磁性側(cè)流免疫層析試紙條的最適磁性微球粒徑為100nm，免疫磁性納米微球制備過程中每毫克磁珠最佳抗體加入量為40μg，最佳的NC膜型號(hào)為Sartourius CN140，整個(gè)檢測(cè)過程可在15分鐘內(nèi)完成。
　　3.該檢測(cè)體系定性檢測(cè)CEA標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度范圍為10ng/ml～1000ng/ml，定量檢測(cè)的范圍為0.1ng/ml～1000ng/ml，并且特異性高，穩(wěn)定性和重復(fù)性均良好。

6、>　　4.該試紙條與臨床電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)臨床血液樣本的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好(P＜0.05)，本檢測(cè)方法批間重復(fù)性可(P＞0.05)，具有較高的精密度和穩(wěn)定性。
　　結(jié)論:
　　本研究以超順磁性納米微球?yàn)闃?biāo)記物，研制了CEA磁性側(cè)流免疫層析檢測(cè)試紙條，通過利用磁信號(hào)檢測(cè)儀(MAR)能夠?qū)ρ迥[瘤標(biāo)記物CEA進(jìn)行定量和可視化檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)血液腫瘤標(biāo)記物快速、簡便、準(zhǔn)確檢測(cè)的目標(biāo)，并且降低了檢測(cè)成本和提高了工作效率，具有廣泛的應(yīng)用前