磁性免疫層析技術(shù)在氯霉素殘留快速檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、在食品安全事故頻發(fā)的今天,食品安全問題更加受到人們的關(guān)注,同時也對食品安全檢測技術(shù)提出了更高的要求。
　　氯霉素(Chloramphenicol,CAP)作為一種廣譜抗生素,因其價廉高效,曾作為藥物應(yīng)用于人和動物細(xì)菌性疾病的治療,并作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、水產(chǎn)業(yè)?，F(xiàn)已證明,氯霉素對機(jī)體有很大的毒副作用,因此世界上許多國家明令禁止將此藥用于可食用性動物。歐盟對氯霉素的檢測限由原來的10μg/kg降至0.1μg/kg,比原標(biāo)準(zhǔn)

2、要求提高了100倍;美國FDA規(guī)定的檢出限也由原來的5μg/kg降為了0.3μg/kg。為了嚴(yán)格監(jiān)控氯霉素的使用,抑制氯霉素引起的食品安全問題的發(fā)生,建立高效、靈敏、經(jīng)濟(jì)的氯霉素殘留分析方法很有必要。
　　磁性免疫層析法(magneticlateralflowimmunoassays,MLFIAs)作為快速檢測方法的新秀,以超順磁性微球代替?zhèn)鹘y(tǒng)的膠體金作為信號標(biāo)記物,即可以通過肉眼觀察或光學(xué)比色法實現(xiàn)快速定性分析,又可以進(jìn)一步利用

3、超順磁材料特殊的磁信號實現(xiàn)免疫層析技術(shù)的定量化檢測。
　　本論文考查了幾種不同來源的超順磁性納米微球,篩選了適用于免疫層析分析的磁球,研究優(yōu)化了磁性免疫層析條件,建立了一種將免疫磁分離與免疫磁層析相結(jié)合的磁性免疫層析快速檢測新方法,并將其用于氯霉素殘留的快速檢測。
　　主要研究內(nèi)容包括:
　　1)篩選出適合進(jìn)行磁性免疫層析的磁性納米粒:主要對8種不同來源超順磁性微球的性能進(jìn)行了對比,選擇出了適合進(jìn)行磁性免疫層析的磁球A

4、和磁球D。
　　2)優(yōu)化了磁微粒免疫層析條件:比較了磁球A和磁球D在不同鹽濃度和pH下的性能差異。研究了不同上樣緩沖液配方對磁球展層的影響,發(fā)現(xiàn)表面活性劑和高濃度蛋白對于磁球的展層具有明顯促進(jìn)作用,磁球A在0.05％以上的Tween20中就可以完全展層,在5%以上的BSA中就可以部分展層,后使用含5%BSA和1%Tween20的0.01MPBS作為上樣緩沖液。研究了干燥對磁球展層的影響,發(fā)現(xiàn)干燥后的磁球更趨向于團(tuán)聚。由于磁球D同小

5、鼠IgG的偶聯(lián)物,會發(fā)生團(tuán)聚而影響展層,故最終選用磁球A開展氯霉素殘留檢測方法研究。
　　3)建立了氯霉素殘留的磁性免疫層析檢測新方法:從磁球與抗氯霉素單抗的偶聯(lián)條件,T點、C點的包被條件,及免疫磁分離技術(shù)用于樣品處理等條件,對氯霉素的檢測進(jìn)行了優(yōu)化。選擇CB作為包被緩沖液,C點的GAM最佳包被濃度為1:100倍稀釋,T點為1:5倍稀釋。磁球:mAbCAP最佳偶聯(lián)比為100:1。100:1的偶聯(lián)比與25:1的比較,CAP檢測限由1