LC-MS-MS法測(cè)定小鼠血漿和腦組織中LJP1207含量并應(yīng)用于藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、哺乳動(dòng)物的血漿和組織中均含氨基脲敏感型胺氧化(semicarbazide-sensitive amine oxidase,SSAO),SSAO含量升高會(huì)引發(fā)各種炎癥及心腦血管疾病。肼類(lèi)化合物L(fēng)JP1207[N’-(2-phenyl-allyl)-hydrazine hydrochloride]對(duì)SSAO活性具有很強(qiáng)的抑制能力,并且特異性高,在治療急慢性炎癥及老年性癡呆疾病有顯著效果,但是LJP1207在生物樣本中不穩(wěn)定。因此,本研究應(yīng)用

2、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS),建立了簡(jiǎn)單快速的BALB/C小鼠血漿和腦組織中LJP1207含量的測(cè)定方法,并將這個(gè)方法成功的應(yīng)用于LJP1207的藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　主要研究?jī)?nèi)容和方法:
　　一、小鼠血漿和腦組織中LJP1207的含量測(cè)定
　　待測(cè)樣本經(jīng)乙腈沉淀蛋白質(zhì)后用乙酰丙酮進(jìn)行衍生化(30℃水浴30min),而后再用C18固相萃取小柱進(jìn)行萃取、濃縮。樣本采用Waters Symmetry C18柱(

3、2.1×50mm,3.5μm)進(jìn)行分離,以甲醇-10mM的醋酸銨水溶液(pH5.0)(75:25,v/v)為流動(dòng)相,流速為0.2mL/min,用ESI源進(jìn)行離子化,以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式進(jìn)行檢測(cè),用于定量的離子對(duì)為m/z213→117。
　　二、LJP1207在BALB/C小鼠及SD大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　BABL/C小鼠與SD大鼠分別經(jīng)腹腔給藥30mg/kg后,BABL/C小鼠于0(對(duì)照)、3、6、9、12、15

4、、30、45、60、90和120min取血與腦組織;SD大鼠于0(對(duì)照)、5、15、30、45、60、90、120、360和720min取血。
　　將收集于1.5mL塑料離心管中的全血立即離心(1,600×g,4min)并將所得血漿收集,吸取所得血漿50μL,與50μL的5％乙酰丙酮水溶液混合,凍存于-80℃冰箱待測(cè);腦組織樣本取出并稱(chēng)量后立即凍存于-80℃,測(cè)定時(shí)取出腦組織樣本,用乙腈沉淀蛋白后進(jìn)行離心,而后用乙酰丙酮進(jìn)行衍生化

5、。血漿和腦組織樣本均經(jīng)過(guò)固相萃取,而后采用LC-MS/MS法測(cè)定LJP1207濃度。
　　研究結(jié)果:
　　一、本研究建立了快速、靈敏、準(zhǔn)確的LC-MS/MS法,既可用于血漿中LJP1207的含量的測(cè)定,也可用于腦組織中LJP1207的含量測(cè)定。其中血漿和腦組織中LJP1207的線性范圍分別為0.1-8μg/mL和0.1-8μg/g。血漿中LJP1207的檢測(cè)限和定量限為0.9和2.8ng/mL,而腦組織的檢測(cè)限和定量限為7.

6、7和22.8ng/g。樣本的日內(nèi)和日間差均小于10%;該方法的相對(duì)回收率為98.5-109%。
　　二、LJP1207在血漿和腦組織中的動(dòng)力學(xué)特征相似。BAB/C小鼠血漿主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)為:曲線下面積(AUC)為159μgminmL-1,半衰期(T1/2)為13.7min,清除率(CL)為189mL/min;BALB/C小鼠腦組織主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)為:曲線下面積(AUC)為139μg·min/g,半衰期(T1/2)為10.0min,清除