電針關(guān)元穴對脊髓損傷后尿潴留大鼠逼尿肌的影響及機制研究.pdf

1、目的:隨著現(xiàn)代交通業(yè)、建筑業(yè)的飛速發(fā)展便利了人們生活、生產(chǎn)的同時，健康與安全隱患也日益突出，外傷等事故所造成的脊髓損傷的高發(fā)病率現(xiàn)象就是其中表現(xiàn)之一。脊髓損傷具有終生致殘率高、治療困難等特點，其并發(fā)癥尿潴留更加使得脊髓損傷患者生活質(zhì)量下降，甚至威脅到生命，故脊髓損傷后尿潴留的治療已成為醫(yī)學研究者高度重視的問題。目前諸多臨床研究證實，中醫(yī)針灸療法對其療效肯定。相對于西醫(yī)療法，針灸療法對本病有其獨特的優(yōu)勢，但其作用機制尚未明確，本實驗旨在研

2、究電針關(guān)元穴對脊髓損傷后尿潴留模型大鼠逼尿肌超微結(jié)構(gòu)、逼尿肌細胞凋亡及相關(guān)因子(bax、bcl-2)、逼尿肌興奮性及α—平滑肌肌動蛋白(α—SMA)的表達以及對脊髓中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)及其酪氨酸受體激酶B(TrkB)表達的影響，并探討穴位電針治療本病的可能作用機制。 方法:實驗Ⅰ將健康成年雌性SD大鼠隨機分為正常組、模型組、電針治療組，每組5只；實驗Ⅱ、實驗Ⅲ和實驗Ⅳ均隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組、電針治療組、電

3、針對照組，每組20只。按照經(jīng)典的重物墜擊法建立脊髓損傷后尿潴留大鼠模型。造模的大鼠被重物撞擊脊髓時，身體痙攣性顫動，尾巴痙攣性擺動，雙下肢及軀體回縮樣撲動，大鼠脊髓損傷后立即處于脊髓休克期，膀胱逼尿肌呈現(xiàn)低反射或無反射狀態(tài)，膀胱排尿無力，造模手術(shù)后24小時內(nèi)可在其恥骨聯(lián)合上緣觸及明顯脹大的膀胱，即造模成功。電針治療組給予電針“關(guān)元”穴治療，電針對照組給予電針“水道”穴治療；假手術(shù)組大鼠在被暴露T6—T10椎體后，不做任何損傷處理，5分鐘

4、后直接縫合。電針治療時使用MP150WSW型16導生理記錄儀刺激輸出模塊，采用疏密波，頻率2Hz/15Hz，強度1mA。造模手術(shù)24小時后進行第一次電針，每隔24小時電針一次，電針治療共10次，每次持續(xù)刺激20分鐘。分別運用電鏡觀察逼尿肌細胞和組織的超微結(jié)構(gòu)；應用末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的缺口末端標記技術(shù)(TUNEL)及免疫組織化學SP法，觀察膀胱逼尿肌細胞凋亡情況和凋亡相關(guān)因子bcl-2和bax的表達；應用逼尿肌肌條實驗行離體逼尿

5、肌最小收縮張力和收縮頻率的測定，觀察逼尿肌興奮性，并用免疫組織化學SP法檢測逼尿肌肌層組織中α—SMA的表達，觀察其收縮能力；免疫組化SP法檢測損傷段脊髓組織中BDNF及TrkB的表達。所得數(shù)據(jù)輸入計算機，經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行處理，多組數(shù)據(jù)間的比較，采用單因素方差分析或者RxC表X2檢驗，檢驗標準α值取0.05，檢驗結(jié)果P＜0.05為有統(tǒng)計學意義，實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差((x)±S)表示。 結(jié)果:(1)與正常組比較

6、，模型組大鼠逼尿肌超微結(jié)構(gòu)變化主要為細胞排列紊亂，細胞核內(nèi)染色質(zhì)邊集、濃縮，大量線粒體水腫，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴張、水腫、局部空泡化；平滑肌細胞之間膠原纖維大量增多。電針關(guān)元穴治療后逼尿肌超微結(jié)構(gòu)較模型組有較大變化，以線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和膠原纖維的改變最明顯，表現(xiàn)為線粒體的水腫程度與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的擴張程度明顯減輕，平滑肌細胞之間的膠原纖維的數(shù)量明顯減少，細胞排列變規(guī)則。(2)在細胞凋亡的觀察中，正常組和假手術(shù)組細胞凋亡呈較低表達，兩組無明顯差

7、異(P＞0.05)，模型組細胞凋亡指數(shù)(AI)高于正常組(P＜0.05)；關(guān)元組AI低于模型組及水道組(P＜0.05)。關(guān)元組bax蛋白表達較水道組及模型組減少(P＜0.05)。關(guān)元組bcl-2蛋白表達較水道組及模型組無明顯差異(P＞0.05)。(3)與正常組和假手術(shù)組相比，模型組逼尿肌最小收縮張力增高，收縮頻率減慢(P＜0.05)；正常組和假手術(shù)組比較，無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)；與模型組相比，電針組最小收縮張力均明顯降低，收縮

8、頻率增加(P＜0.05)。關(guān)元組與水道組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在光鏡下任一視野內(nèi)對逼尿肌α—SMA表達進行觀察，發(fā)現(xiàn)各組均呈陽性表達，正常組和假手術(shù)組呈強陽性表達，模型組呈弱陽性表達，低于正常組，模型組散在有少量斑塊狀強陽性表達區(qū)域，電針水道組和電針關(guān)元組任一視野內(nèi)的大部分區(qū)域均呈中度陽性表達，散在有少量斑塊狀強陽性表達區(qū)域，而電針關(guān)元組斑塊狀強陽性區(qū)域大于電針水道組和模型組。(4)在各組脊髓中BDNF及其受體TrkB

9、表達水平觀察中，模型組BDNF及TrkB的表達均比正常組和假手術(shù)組高，關(guān)元組和水道組均明顯高于其它組，差異有顯著性(P＜0.05)，且關(guān)元組高于水道組(P＜0.05)。 結(jié)論:逼尿肌超微結(jié)構(gòu)的變化、細胞凋亡的發(fā)生、細胞凋亡因子(bcl-2、bax)、逼尿肌興奮性的改變、α—SMA、BDNF、TrkB均參與了脊髓損傷后尿潴留的發(fā)生發(fā)展過程，電針關(guān)元穴療法對脊髓損傷后尿潴留大鼠逼尿肌的病理狀態(tài)具有良好的調(diào)整作用，推測這一作用可能通過