不同時間負載抗原的樹突狀細胞誘導的抗肝癌效應.pdf

1、理論背景：肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居世界之首，嚴重威脅我國人民的生命健康。據1998年全國衛(wèi)生統計年報資料，我國城市男性肝癌的死亡率為30.40/10萬，女性為10.60/10萬，手術治療對早期患者有肯定效果，而對轉移或腹水形成后的患者，不僅手術困難，術后復發(fā)率也很高，放療、化療對肝癌的療效不能肯定，肝癌的臨床治療迫切需要新的方法。近年來，以免疫治療為代表的生物

2、治療作為腫瘤治療的第四模式日益受到重視，作為肝癌治療的重要輔助手段之一，生物治療已逐漸顯示出其獨特的優(yōu)越性。 樹突狀細胞(dendriticcells，DC)是已知體內功能最強的專職的抗原呈遞細胞(antigenpresentingcells，APC)。DC能有效的攝取，加工及呈遞抗原，并能刺激未致敏T細胞的增殖與活化，是啟動、調控并維持體內特異性免疫誘導的中心環(huán)節(jié)。制備腫瘤特異性DC腫瘤疫苗，可以有效的激發(fā)特異性的持久的腫瘤免

3、疫誘導。這已經成為腫瘤免疫治療的一個熱點，并在臨床研究中取得了令人振奮的成果。 實驗目的：建立穩(wěn)定可靠的誘導DC的途徑及調控其成熟的方法；進行肝癌樹突狀細胞免疫瘤苗的體外實驗，評價不同時間應用肝癌細胞凍融抗原負載樹突狀細胞所誘導的抗肝癌效應。 實驗方法：采集健康足月剖宮產孕婦胎盤端臍血，分離臍血單核細胞(cordbloodmononuclearcell，CBMNC)及T淋巴細胞，用rhGM-CSF、rhIL-4及TNF-

4、a聯合誘導CBMNC分化為DC，并以流式細胞儀及免疫組織化學染色鑒定；在培養(yǎng)周期內選取不同時間(第3、4、5、6、7天)用肝癌細胞凍融抗原負載CBMNC-DC，以不同時間負載抗原的DC刺激自體淋巴細胞活化為CTL，并用CTL對肝癌細胞進行殺傷，MTT測定活化的自體淋巴細胞的相對數量和CTL對肝癌細胞的殺傷效果。 實驗結果：1、CBMNC在細胞因子rhGM-CSF，IL-4及TNF-a配伍作用下體外誘導分化為具有典型形態(tài)和表型的D