樹突狀細胞聯(lián)合超抗原SEA激活TIL抗小鼠肝癌研究.pdf

1、目的：探討小鼠H22肝癌細胞(H22細胞)抗原致敏樹突狀細胞(dendriticcell，DC)聯(lián)合超抗原(superantigen，SAg)葡萄球菌腸毒素A(staphylococcalenterotoxinA，SEA)激活腫瘤浸潤淋巴細胞(tumorinfiltratinglymphocyte，TIL)體外對小鼠H22細胞殺傷活性的作用，并將H22全細胞抗原致敏的DC聯(lián)合SEA激活TIL(H22-DC-SEA-TIL)過繼免疫荷瘤小

2、鼠，探索H22-DC-SEA-TIL在抗腫瘤免疫調節(jié)和抑瘤方面的作用，為肝癌的過繼免疫治療尋找新的有效方法和途徑。 方法：(1)從正常小鼠四肢骨中提取骨髓細胞，利用特異性的CD4、CD8a、CD45R單克隆抗體、補體緩沖液和DC的半粘附性，去除粒細胞、T細胞、B淋巴細胞、NK細胞、單核細胞和巨噬細胞，再用小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(murinegranulocytemarcophage-colonystimulatingf

3、actor,GM-CSF)和小鼠白細胞介素-4(murineinterleukin-4，IL-4)進行體外培養(yǎng)，以獲得大量高純度的成熟DC。(2)用淋巴細胞分離液從荷瘤小鼠瘤體中分離提取TIL并在體外用含10％小牛血清和重組小鼠白細胞介素-2(recombinedmurineIL-2，rmIL-2)的RPMI1640完全培養(yǎng)基進行培養(yǎng)擴增。(3)在DC培養(yǎng)過程中加入H22細胞全細胞抗原致敏DC。(4)用已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL。(

4、5)體外細胞毒性實驗：效應細胞分為8組，分別是：①已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL組②已致敏DC激活TIL組③SEA激活TIL組④TIL組⑤已致敏DC聯(lián)合SEA激活脾淋巴細胞組⑥已致敏DC激活脾淋巴細胞組⑦SEA激活脾淋巴細胞組⑧脾淋巴細胞組⑨注射生理鹽水組；第10組為20只未荷瘤小鼠，用生理鹽水尾靜脈注射。檢測各組治療后小鼠脾淋巴細胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF水平，并觀察腫瘤大小及重量變化和鏡下病理改變情況。 結果：

5、(1)體外細胞毒性實驗結果：①各組效應細胞對H22細胞的殺傷活性均明顯高于各自對應效應細胞對S180細胞的殺傷活性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。②TIL對H22細胞的殺傷活性[殺傷率為(51.21±3.00)％]高于脾淋巴細胞對H22細胞的殺傷活性[殺傷率為(19.60+2.17)％]，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；用不同方式激活的TIL對H22細胞的殺傷活性均高于各自對應方式激活的脾淋巴細胞對H22細胞的殺傷活性，差異有統(tǒng)計

6、學意義(P<0.01)。③SEA激活的TIL對H22細胞的殺傷活性[殺傷率為(62.70±2.42)％]與TIL對H22細胞的殺傷活性[殺傷率為(51.21±3.00)％]比較相對較高，已致敏DC激活的TIL對H22細胞的殺傷活性更高[殺傷率為(75.23±2.71)％]，而已致敏DC聯(lián)合SEA激活的TIL對H22細胞的殺傷活性最高[殺傷率為(85.66±2.62)％]，它們之間相互比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。(2)過繼免疫

7、治療荷瘤小鼠實驗結果：①已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL可明顯誘導提高小鼠脾淋巴細胞NK、LAK和CTL活性，其活性分別為(34.23±1.52)％、(35.50±1.89)％、(39.83±1.55)％，其血清TNF水平為(46.24±1.26)U/ml，與已致敏DC激活TIL組、SEA激活TIL組、TIL組、已致敏DC聯(lián)合SEA激活脾淋巴細胞組、已致敏DC激活脾淋巴細胞組、SEA激活脾淋巴細胞組、脾淋巴細胞組和注射生理鹽水的荷瘤小鼠組

8、相應指標比較，差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.01)；而與注射生理鹽水的未荷瘤小鼠比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。②荷瘤小鼠腫瘤生長情況：已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL治療組可觀察到腫瘤的生長明顯受到抑制，其治療后的腫瘤大小為(0.402±0.10)cm、瘤重為(0.394±0.11)g和抑瘤率為79.39％，與其余各治療組相比較，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。③病理切片可見已致敏DC聯(lián)合SEA激活TIL治療組瘤體組織內大量淋