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1、目的：克隆表達腸出血性大腸桿菌(EnterohemorrhagicEscherichiacoli,EHEC)0157:H7志賀樣毒素2B亞單位(Shiga-liketoxin，Stx2B)，并對其初步純化。 方法：設(shè)計寡核苷酸引物，利用PCR法自EHEc0157:H7基因組擴增Stx2B的編碼基因stx2b，TA克隆后連接到表達載體pET-28a以構(gòu)建重組質(zhì)粒，經(jīng)測序鑒定后轉(zhuǎn)入表達宿主菌E.coliBL-21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
2、，IPTG誘導(dǎo)表達，以SDS-PAGE和Western-blot分析重組表達產(chǎn)物，固相親和層析純化重組蛋白。 結(jié)果：PCR擴增stx2b因約210bp，成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-stx2b，并在E.coliBL21(DE3)中得到高效表達，目的蛋白的相對分子質(zhì)量約為7.5kD，約占總蛋白量的40％：免疫印跡顯示目的蛋白可與特異性抗體發(fā)生為特異性陽性反應(yīng)。 結(jié)論：成功克隆EHEC0157:H7Stx2b基因，在原核系統(tǒng)
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