異丙酚對(duì)大鼠動(dòng)脈平滑肌鈣激活鉀通道和鈣池操縱的鈣通道的作用.pdf

1、目的: 1．研究異丙酚對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞IKCa的作用，探討異丙酚是否通過(guò)直接影響平滑肌細(xì)胞的BKCa通道來(lái)舒張血管平滑肌。 2．研究異丙酚對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣池操縱的鈣離子內(nèi)流(store-operatedCa2+entry，SOCE)的影響，探討異丙酚是否減少SOCE從而降低胞內(nèi)鈣濃度，舒張血管平滑肌。 方法: 1．急性分離大鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和腸系膜動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，用全細(xì)胞

2、膜片鉗方式記錄IKCa，并用特異性的BKCa通道阻斷劑paxilline鑒定該電流。 2．觀察不同濃度的異丙酚(3×10-5mol/L，1×10-4mol/L，3×10-4mol/L，1×10-3mol/L)對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞IKCa的影響。 3．用全細(xì)胞膜片鉗方式記錄大鼠腸系膜動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的IKCa，觀察異丙酚(3×10-4mol/L)對(duì)IKCa的影響。 4．用熒光指示劑加載大鼠腹主動(dòng)脈平滑

3、肌細(xì)胞，通過(guò)熒光強(qiáng)度變化觀察胞內(nèi)鈣濃度變化。使用P2Y受體激動(dòng)劑ATP啟動(dòng)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放從而激活SOC、介導(dǎo)外鈣內(nèi)流的機(jī)制，分別觀察外灌流液中有鈣和無(wú)鈣時(shí)，異丙酚對(duì)胞內(nèi)鈣濃度變化的影響。 5．用熒光指示劑加載大鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，在無(wú)鈣外灌流時(shí)用thapsigargin耗竭鈣庫(kù)中的鈣離子，再細(xì)胞外給鈣離子(1.5mmol/L)，引起鈣內(nèi)流，觀察異丙酚對(duì)鈣內(nèi)流的影響。 結(jié)果: 1．可記錄到一束在20-30 mV被激

4、活的外向電流，隨指令電壓增加，其電流幅值增大，且在400 ms時(shí)程內(nèi)未失活，符合IKCa的特性。BKCa通道阻斷劑paxilline完全阻斷該電流證實(shí)記錄到的電流是IKCa。 2．四個(gè)濃度的異丙酚(3×10-5mol/L，1×10-4mol/L，3×10-4mol/L，1×10-3mol/L)均對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞IKCa有抑制作用，抑制的幅度隨濃度的增加而增加。 3．異丙酚(3×10-4mol/L)抑制大鼠腸系膜動(dòng)