鈣釋放激活鈣通道抑制劑2-APB對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景:Ca2+是一種普遍存在的第二信使,控制著眾多的細(xì)胞功能,從短期的細(xì)胞收縮和分泌反應(yīng)到長(zhǎng)期的轉(zhuǎn)錄、生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂調(diào)節(jié)。鈣池操縱的Ca2+內(nèi)流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)參與許多重要的Ca2+信號(hào)生理過(guò)程。目前研究的最清楚、最典型的SOC電流是鈣釋放激活的鈣(Ca2+release-activatedCa2+,CRAC)電流。CRAC已被證明存在于多種細(xì)胞中,如肥大細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等,

2、并且STIM1和Orai1介導(dǎo)的CRAC對(duì)于免疫細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖發(fā)揮著重要作用。在血管增生性疾病的發(fā)病過(guò)程中,許多血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)會(huì)由收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇?并伴隨著細(xì)胞的大量增殖、向血管內(nèi)層的遷移和過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生。
　　 目的:證明CRAC通道參與VSMCs的增殖過(guò)程,2-APB能夠有效抑制其增殖,為血管增生性疾病的治療提供有前景的新藥。
　　 方法:免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CRAC的組成成分STI

3、M1和Orai1在大鼠血管組織水平上的表達(dá)；分離大鼠原代VSMCs,并進(jìn)行平滑肌α-actin(SMα-actin)的免疫熒光鑒定；應(yīng)用Western blotting和免疫熒光兩種方法檢測(cè)STHM1和Orai1在VSMCs中的存在；通過(guò)形態(tài)觀察和SMα-actin的Western blotting檢測(cè)來(lái)證實(shí)大鼠VSMCs在培養(yǎng)過(guò)程中的表型轉(zhuǎn)換；Western blotting方法檢測(cè)表型轉(zhuǎn)換中STIM1和Orai1表達(dá)量的變化；觀察2

4、-APB對(duì)VSMCs細(xì)胞形態(tài)的影響,Brdu免疫熒光檢測(cè)2-APB對(duì)VSMCs增殖的抑制作用；Western blotting檢測(cè)2-APB對(duì)VSMCs中STIM1和Orai1表達(dá)量的影響。
　　 結(jié)果:大鼠血管上有CRAC組成蛋白STIM1和Orai1的表達(dá)；原代VSMCs中也存在STIM1和Orai1；隨著體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)VSMCs會(huì)發(fā)生由收縮型向合成型的表型轉(zhuǎn)換,在此過(guò)程中STIM1和Orai1的表達(dá)量升高；2-APB可