X射線和喜樹堿對(duì)外周血淋巴細(xì)胞不同細(xì)胞亞群生物學(xué)效應(yīng)的研究.pdf

1、腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，其發(fā)病率逐年呈上升趨勢(shì)。目前，惡性腫瘤主要以外科手術(shù)為治療手段，術(shù)后合并放療和化療等綜合治療。一直以來(lái)細(xì)胞增殖過(guò)多而細(xì)胞凋亡過(guò)少被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要原因。越來(lái)越多的資料表明，腫瘤是一類細(xì)胞周期性疾病。細(xì)胞死亡規(guī)律是臨床設(shè)計(jì)放化療方案的重要依據(jù)，不同細(xì)胞周期內(nèi)的腫瘤細(xì)胞接受放化療后，療效差別卻很大。
　　 近些年來(lái)，一些科學(xué)家發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞這個(gè)快速增殖的群體中存在著一群處于靜止期的細(xì)胞，這群處

2、于靜止期的細(xì)胞在放化療的打擊下的細(xì)胞凋亡率與處于不斷增殖的腫瘤組織細(xì)胞對(duì)各種打擊因素的反應(yīng)也各不相同，而另一些研究者所關(guān)注的側(cè)群干細(xì)胞（SP）及腫瘤干細(xì)胞（CSC）也是處于靜止期細(xì)胞。
　　 然而進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，這些處于靜止期的細(xì)胞群是與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展甚至耐藥和腫瘤復(fù)發(fā)緊密相關(guān)。因此，研究腫瘤細(xì)胞不同細(xì)胞亞群在放化療打擊下的損傷修復(fù)反應(yīng)及其死亡規(guī)律是腫瘤研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。我們以正常人外周血淋巴細(xì)胞為模型構(gòu)建不同的細(xì)胞周期狀態(tài)

3、來(lái)分別研究不同亞群的腫瘤細(xì)胞在放化療打擊下的損傷修復(fù)反應(yīng)及其死亡規(guī)律。在過(guò)去的三十年里，少有研究靜止?fàn)顟B(tài)和增殖狀態(tài)的人外周血淋巴細(xì)胞（PBLs）對(duì)外界刺激的反應(yīng)能力，他們僅用堿性彗星電泳從流行病學(xué)角度簡(jiǎn)單地加以分析。
　　 而在本研究中，選用γH2AX 標(biāo)志物分析不同細(xì)胞周期狀態(tài)PBLs DNA損傷反應(yīng)來(lái)闡明其對(duì)放化療的敏感性。γH2AX 形成必然反映DNA損傷，化療藥物喜樹堿和X 射線作用于G0 期和經(jīng)PHA 誘導(dǎo)增殖的PBL

4、s 時(shí)，免疫印記及流式結(jié)果均顯示增殖期的PBLs γH2AX表達(dá)較靜止期多，這表明增殖期PBLs 較靜止期損傷更明顯，放化療敏感性更顯著。同時(shí)通過(guò)兩組凋亡率的比較也發(fā)現(xiàn)，增殖期細(xì)胞的死亡更多，其相關(guān)蛋白Bcl-2，caspase-9和caspase-3的表達(dá)也與該現(xiàn)象相符。為了明確H2AX在上述生物過(guò)程中的作用，通過(guò)RNAi 技術(shù)在293T中抑制H2AX的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)CPT和X-ray 誘導(dǎo)的凋亡無(wú)顯著影響，故H2AX 可能僅作為DN