共信號(hào)分子B7-H3與結(jié)直腸癌侵襲相關(guān)性的初步研究.pdf

1、目的:
　　共信號(hào)分子B7-H3作為重要的免疫分子，在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。結(jié)直腸癌多伴隨肝轉(zhuǎn)移，研究證明其與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)相關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道:在結(jié)直腸癌的患者中常伴有B7-H3的異常表達(dá)，且和預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。本論文擬從B7-H3的非免疫學(xué)功能的角度，以結(jié)直腸癌腫瘤標(biāo)本和結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW480為研究對(duì)象，分析結(jié)直腸癌中B7-H3和MMPs家族成員MMP2、MMP9表達(dá)水平的相關(guān)關(guān)系，研究B7-H3對(duì)結(jié)

2、腸癌細(xì)胞侵襲能力的調(diào)控作用。
　　方法:
　　1、利用免疫組化方法對(duì)87例結(jié)直腸癌標(biāo)本進(jìn)行B7-H3、MMP2和MMP9染色，并按表達(dá)強(qiáng)弱進(jìn)行評(píng)分，分別為陰性0，弱陽性1+，陽性2+，強(qiáng)陽性3+。
　　2、構(gòu)建人B7-H3全長基因重組表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)染SW480，經(jīng)篩選、Real-timePCR、WesternBlot、激光共聚焦等方法驗(yàn)證，構(gòu)建高表達(dá)B7-H3的結(jié)直腸癌細(xì)胞SW480穩(wěn)定株。
　　3、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染B7

3、-H3siRNA片段，建立SW480-B7-H3+kd敲減模型;B7-H3高表達(dá)或干擾后，WesternBlot檢測(cè)MMP2和MMP9的表達(dá)，Transwell分析細(xì)胞的侵襲能力。
　　結(jié)果:
　　1、結(jié)直腸癌患者腫瘤中B7-H3的表達(dá)與TNM分期的T分期有關(guān)，與N分期無關(guān);B7-H3的表達(dá)與MMP2、MMP9呈正相關(guān)，特別與MMP9具有較好的線性關(guān)系。
　　2、成功構(gòu)建SW480穩(wěn)轉(zhuǎn)對(duì)照株和高表達(dá)B7-H3的SW48

4、0穩(wěn)轉(zhuǎn)株，分別命名為SW480-NC和SW480-B7-H3。
　　3、成功構(gòu)建B7-H3敲減細(xì)胞株，命名為SW480-B7-H3+kd;B7-H3高表達(dá)后，MMP2和MMP9的表達(dá)水平升高，細(xì)胞侵襲能力顯著增強(qiáng);反之，B7-H3表達(dá)被干擾后，MMP2和MMP9的表達(dá)降低，細(xì)胞侵襲能力隨之減弱。
　　結(jié)論:
　　1、結(jié)直腸癌組織中B7-H3的表達(dá)與腫瘤侵襲深度有關(guān)，與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，且與基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2和MM

5、P9關(guān)系密切。
　　2、建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株后，可對(duì)B7-H3在結(jié)直腸癌中發(fā)揮的生物學(xué)功能及其參與的信號(hào)通路進(jìn)行深入的研究。
　　3、結(jié)直腸癌細(xì)胞中高表達(dá)的B7-H3可以上調(diào)細(xì)胞侵襲相關(guān)的金屬蛋白酶的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　綜上所述，本論文從細(xì)胞和組織水平上證實(shí)，結(jié)直腸癌中B7-H3的表達(dá)與基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)呈正相關(guān)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。構(gòu)建的高表達(dá)B7-H3的結(jié)直腸癌穩(wěn)轉(zhuǎn)株SW480-B7-H3已成為