不同時機轉(zhuǎn)染基因?qū)ν孟骂M骨牽引區(qū)細胞周期蛋白表達的影響.pdf

1、背景：牽引成骨術(shù)(distraction osteogenesis, DO)即屬于外科手術(shù),也是一種內(nèi)源性骨組織工程;是在1905年由Codivilla首先提出通過外科手術(shù)延長肢體的方法,于1992年McCarthy首次將其引入到顱頜面外科用于下頜骨延長,經(jīng)過近20年的基礎研究及臨床應用,DO技術(shù)日臻成熟，現(xiàn)已成為下頜骨短小、缺損等畸形患者的主要治療手段之一，并在顱頜面外科領域取得了卓越的進展；然而,牽引裝置固定不牢、創(chuàng)面感染、骨不連等

2、因牽引裝置較長時間留置體內(nèi)所引發(fā)的各種并發(fā)癥及較長療程均有礙于DO在臨床的推廣及應用。因此，如何更有效促進DO牽引間隙新骨生成、縮短療程、減少DO治療過程中患者的不適及預防并發(fā)癥的發(fā)生，已成為目前顱頜面外科界關注的焦點。近年來,基因治療技術(shù)促進DO新骨形成得到越來越多的研究者的重視,而且在轉(zhuǎn)染基因的選擇、轉(zhuǎn)染途徑、轉(zhuǎn)染時機及對新骨組織骨形成蛋白的影響等方面都取得了一定的成績，但其分子學機制有待進一步研究。
　　目的：本項目在課題組

3、前期研究的基礎上，以新西蘭大白兔復制下頜骨DO動物模型，并在不同時機下頜骨牽引區(qū)通過電脈沖介導局部轉(zhuǎn)染pIRES-hBMP2-hVEGF165質(zhì)粒，觀察在不同時間點轉(zhuǎn)染對下頜骨DO新骨形成過程中細胞周期調(diào)節(jié)蛋白表達的影響，闡明pIRES-hBMP2-hVEGF165質(zhì)粒體內(nèi)局部轉(zhuǎn)染干預下頜骨DO新骨形成的分子機制，探索新的體內(nèi)基因靶向治療方法，尋找通過電脈沖介導的pIRES-hBMP2-hVEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染下頜骨DO治療的最佳轉(zhuǎn)染時

4、機，為臨床聯(lián)合應用hBMP2和hVEGF165基因治療顱頜面骨畸形提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：選擇健康、成年(6個月)新西蘭大白兔48只,實驗前馴養(yǎng)1周;在全麻下沿雙側(cè)下頜骨下緣切開皮膚、分離皮下各層組織(完整的保留骨膜)、顯露下頜骨體并施行截骨術(shù)后,用下頜骨牽引裝置將截斷的骨端原位固定,并逐層縫合切口,外置牽引裝置旋轉(zhuǎn)桿。將實驗動物隨機分成4組(A組、B組、C組、D組);A組于手術(shù)后即刻、B組于術(shù)后3天、C組于術(shù)后第14天在

5、雙側(cè)牽引區(qū)局部注射2μg(0.1μg/μl)重組質(zhì)粒pIRES-hBMP2-hVEGF165后,均給予電穿孔刺激(電脈沖參數(shù):電壓為200V,電容為10μF,頻率為0.2Hz,平均脈沖寬度為2.5ms,單脈沖刺激,共6個脈沖,3個脈沖后即更換正負極);D組:只行單純骨牽引不行局部給藥；A、B、C、D各組于手術(shù)結(jié)束3天后開始以每天1mm的速度進行牽引,每天2次,共持續(xù)牽引10天;牽引期結(jié)束后進入固定期,各組分別于于固定期第1、2、4周各處

6、死兔子3只并取材,并行組織學及免疫組織化學檢查細胞周期蛋白Cyclins A、D1、E的表達情況,利用病理圖像分析系統(tǒng)(CMIAS-2001A)分析,結(jié)果采用單因素方差分析和q檢驗。
　　結(jié)果：從不同轉(zhuǎn)染時間對cyclin A、D、E表達來看,固定期第7天時B組(牽引期轉(zhuǎn)組,即術(shù)后3天通過電脈沖介導轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒pIRES-hBMP2-hVEGF165)優(yōu)于A組(潛伏期轉(zhuǎn)染組)、C組(固定期轉(zhuǎn)染組)、D組(只牽引不轉(zhuǎn)染組)。