ApoA-I調(diào)節(jié)LPS處理泡沫細(xì)胞鋅指蛋白36去磷酸化的抗炎作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察載脂蛋白 A-I(apolipoproteinA-I, apoA-I)對脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)誘導(dǎo) THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞鋅指蛋白36(Tristetraprolin, TTP)去磷酸化和炎癥因子表達(dá)的影響，探討TTP翻譯后修飾在apoA-I抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)中的作用及其機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng) THP-1細(xì)胞株，用100μmol/L的佛波酯(phorbol12-myr

2、istate13-acetate, PMA)刺激細(xì)胞24h，使其誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞，并以50μg/ml的氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, oxLDL)孵育細(xì)胞使其轉(zhuǎn)化為 THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞。以apoA-I和/或 LPS處理細(xì)胞，采用ELISA檢測白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,

3、TNF-α)、IL-6和IL-8的表達(dá)；采用 Western-Blot觀察 apoA-I對LPS誘導(dǎo) THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞鋅指蛋白36(tristetraprolin, TTP)和磷酸化TTP(tristetraprolin phosphorylation, phospho-TTP)、鈣調(diào)蛋白(calmodulin, CaM)、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin, CaN)表達(dá)的影響。放線菌素D(actinomycin D

4、, Act D)終止轉(zhuǎn)錄后，實時定量 PCR檢測 IL-1β等多種炎癥因子 mRNA的表達(dá)。分別使用 CaM抑制劑(W7)、CaN抑制劑(FK506)、TTP小 RNA干擾(siRNA) 處理細(xì)胞，以ELISA、實時定量 PCR等方法分別檢測巨噬細(xì)胞炎癥因子蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)；發(fā)色底物法檢測 CaM和CaN的活性。
　　結(jié)果：相對于 LPS單獨處理組，apoA-I預(yù)處理 THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞2h后顯著降低

5、LPS誘導(dǎo)的炎癥因子 IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8表達(dá)水平；Act D終止轉(zhuǎn)錄后，apoA-I促進(jìn) IL-1βmRNA的降解；apoA-I促進(jìn) LPS刺激THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞 TTP去磷酸化，對CaN和CaM表達(dá)沒有影響，但增強(qiáng) CaM和CaN活性。TTP siRNA下調(diào) TTP的表達(dá)，并明顯抑制apoA-I促進(jìn) THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞 IL-1βmRNA降解的效應(yīng)。W7和FK506分別抑制 CaM和Ca