黃芩苷對大鼠肺成纖維細胞及肌成纖維細胞CTGF和α-SMA表達的影響.pdf

1、目的:肺纖維化的病理特點是肺肌成纖維細胞異常增多，過度的細胞外基質沉積。α-平滑肌肌動蛋白(smoothmuscleactin，α-SMA)是肌成纖維細胞(myofibroblast，MFB)的標志物。轉化生長因子-β1(transformingrowthfactor-beta，TGF-β1)是刺激成纖維細胞向肌成纖維細胞轉化的主要細胞因子。結締組織生長因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）是TGF-

2、β1的下游因子。肺成纖維細胞轉化為肌成纖維細胞時，CTGF表達明顯增加。黃芩苷(Baicalin)是從中草藥黃芩中分離出來的一種黃酮類化合物，具有抗纖維化作用。但黃芩苷對于離體肺成纖維細胞和肌成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達的影響目前尚未見報道。因此，本實驗通過離體培養(yǎng)大鼠肺成纖維細胞及肌成纖維細胞，觀察黃芩苷對肺成纖維細胞及肺肌成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達的影響，為黃芩苷在臨床肺纖維化中的防治提供研究資料。
　　

3、 方法:體外分離培養(yǎng)原代雄性SD大鼠(150-170g)肺成纖維細胞;用TGF-β誘導肺成纖維細胞轉化為肌成纖維細胞;MTT法測定黃芩苷對肺成纖維細胞及肌成纖維細胞存活率的影響;WesternBlot法測定肺成纖維細胞及肌成纖維細胞CTGF及α-SMA的蛋白表達。
　　 結果:
　　 1黃芩苷對肺成纖維細胞及肌成纖維細胞存活率的影響
　　 肺成纖維細胞是指正常培養(yǎng)的無TGF-β誘導的肺成纖維細胞，肌成纖維細胞為

4、肺成纖維細胞經(jīng)TGF-β誘導48h且α-SMA表達增加的細胞，對照組為無藥物干擾的。與對照組(0μmol/L)相比，10、20和40μmol/L的黃芩苷對肺成纖維細胞及肌成纖維細胞的存活率均無明顯影響(P＞0.05)，80、160μmol/L濃度的黃芩苷抑制肺成纖維細胞及肌成纖維細胞的存活率(P＜0.01)。提示10-40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細胞及肌成纖維細胞無明顯毒性作用。
　　 2黃芩苷對肺成纖維細胞CTGF及

5、α-SMA蛋白表達的影響
　　 與對照組(0μmol/L)相比，10、20、40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，80、160μmol/L濃度的黃芩苷則抑制肺成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達(P＜0.01)。這提示10-40μmol/L黃芩苷既不增加肺成纖維細胞CTGF表達也不誘導其向肌成纖維細胞轉化，80-160μmol/L黃芩苷則抑制其表達。
　　

6、 3黃芩苷對肺肌成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達的影響
　　 TGF-β誘導后的細胞與正常肺纖維細胞相比，CTGF及α-SMA蛋白表達明顯升高，提示體外肌成纖維細胞誘導成功。與對照組相比(0μmol/L)，10、20、40、80、160μmol/L濃度的黃芩苷呈劑量依賴性的抑制肌成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達(P＜0.01)，提示黃芩苷呈劑量依賴性促進肌成纖維細胞去分化為成纖維細胞。
　　 結論:
　

7、　 110-40μmol/L濃度的黃芩苷對肺成纖維細胞及肌成纖維細胞存活率無影響，80、160μmol/L濃度的黃芩苷則表現(xiàn)出毒性作用。
　　 210-40μmol/L濃度的黃芩苷既不增加肺成纖維細胞CTGF表達也不誘導其向肌成纖維細胞轉化，80-160μmol/L濃度的黃芩苷抑制肺成纖維細胞CTGF及α-SMA蛋白表達。
　　 3黃芩苷呈劑量依賴性的(10、20、40、80、160μmol/L)抑制肌成纖維細胞CTG