子宮平滑肌分娩發(fā)動(dòng)相關(guān)差異基因表達(dá)譜的篩選及意義.pdf

1、目的：探討人類分娩發(fā)動(dòng)時(shí)，不同臨產(chǎn)狀態(tài)及部位的子宮平滑肌組織差異基因表達(dá)譜的變化，篩選出分娩發(fā)動(dòng)相關(guān)的差異表達(dá)基因；并對其中的差異表達(dá)基因在不同臨產(chǎn)狀態(tài)的子宮平滑肌中的基因表達(dá)及孕婦外周血中的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證，探討其臨床意義。 方法：cDNA微陣列技術(shù)：30例健康孕婦(分為未臨產(chǎn)組、自然臨產(chǎn)組和縮宮素誘發(fā)臨產(chǎn)組，每組10例)，剖宮產(chǎn)術(shù)中活檢子宮體部與子宮下段平滑肌組織，分別提取組織總RNA、逆轉(zhuǎn)錄成cDNA、cy3／cy5分

2、別標(biāo)記cDNA探針，與8064條人類全長cDNA微陣列雜交，用Array Vision、MIDAS等軟件分析雜交圖像和數(shù)據(jù)篩查，以比值大于2或小于-2的數(shù)據(jù)點(diǎn)為顯著性差異表達(dá)基因的篩選標(biāo)準(zhǔn)，通過http：／／www．ncbi．nlm．nih．gov、htqp：／／www．chgc．sh．cn等網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫查詢基因的功能，建立人類臨產(chǎn)時(shí)子宮體部比子宮下段、自然臨產(chǎn)子宮體部比未臨產(chǎn)子宮體部及縮宮素誘導(dǎo)臨產(chǎn)子宮體部比未臨產(chǎn)子宮體部平滑肌組織差異

3、基因表達(dá)譜。 半定量：RT-PCR實(shí)驗(yàn)：從上述篩選出的差異表達(dá)基因譜中，選擇高豐度、有顯著差異表達(dá)的熱休克蛋白70KD家族1B(HSPAlB)和低豐度、無顯著差異表達(dá)的電壓依賴性鈣通道-L型α亞單位1C(CACNAlC)，對30例孕婦子宮平滑肌組織中的相對表達(dá)量，采用RT-PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。 免疫散射比濁法、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)：從差異表達(dá)基因譜中，選擇無差異的C-反應(yīng)蛋白(CRP)和有差異的白介素-6(IL-6)基因表達(dá)

4、產(chǎn)物，對140例孕婦外周血中的蛋白表達(dá)變化，分別用免疫散射比濁法、酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)論： 1．分娩發(fā)動(dòng)是多條基因參與的過程； 2．分娩發(fā)動(dòng)時(shí)子宮體部與子宮下段平滑肌組織具有不同的基因變化及應(yīng)激機(jī)制，對子宮下段平滑肌組織的研究不能代替整個(gè)子宮在分娩啟動(dòng)中的變化； 3．縮宮素誘發(fā)臨產(chǎn)的差異基因表達(dá)譜與自然臨產(chǎn)相似，過高表達(dá)的基因可能與病理損傷有關(guān)； 4．目前臨床使用的宮縮抑

5、制劑作用靶點(diǎn)或受體不在共同、顯著性差異表達(dá)的基因譜內(nèi)，有必要篩選新的靶點(diǎn)或受體，設(shè)計(jì)新型宮縮抑制劑，提高早產(chǎn)治療的效果； 5．對差異基因表達(dá)譜中變化幅度大，且存在部位或分娩狀態(tài)差異基因的進(jìn)一步研究可能為臨床監(jiān)測、治療提供新的指標(biāo)、新的途徑。 6．臨產(chǎn)前后子宮平滑肌中HSPAlB、CACNAlC表達(dá)與臨產(chǎn)有關(guān)；對高豐度表達(dá)的基因，選用RT-PCR實(shí)驗(yàn)與芯片實(shí)驗(yàn)均可獲理想的結(jié)果，而對低豐度表達(dá)的基INRT-PCR實(shí)驗(yàn)較芯片實(shí)