香煙煙霧上調(diào)大鼠肺組織和RLE-6TN細胞D4-GDI表達.pdf

1、【目的】：檢測D4-GDI在被動吸煙大鼠肺組織以及CSE處理的RLE-6TN細胞的表達水平變化，從而初步探索D4-GDI是否參與了吸煙相關性COPD的發(fā)病機制。
　　【方法】：
　　1.動物實驗部分：取40只雄性SD大鼠，按隨機原則分成4組，每組10只，按照本實驗室傳統(tǒng)方法復制被動吸煙大鼠模型，檢測肺功能，收集對照組、被動吸煙2個月組、被動吸煙4個月組、被動吸煙4個月戒煙1個月組(戒煙組)大鼠的肺組織標本，HE染色觀察肺組織

2、結構，用免疫組織化學、反轉錄-PCR（RT-PCR）、Western blot方法檢測D4-GDI的表達水平。
　　2.細胞實驗部分：用香煙提取物處理RLE-6TN(大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞)0h、3h、6h、12h、24h，用免疫熒光細胞化學、反轉錄-PCR（RT-PCR）、Western blot方法檢測D4-GDI的表達水平。
　　【結果】：
　　1.動物實驗部分：HE染色示對照組肺組織結構無明顯破壞，吸煙2個月組肺

3、泡壁完整性受損，吸煙4個月組肺組織結構破壞最明顯，戒煙組肺組織結構破壞稍有好轉，但較吸煙4個月組無明顯變化。RT-PCR結果顯示D4-GDI表達最弱的為對照組(1.21±0.06)，接下來是吸煙2個月組（2.09±0.07），吸煙4個月組D4-GDI表達最強（2.45±0.12），戒煙組(1.84±0.05)較吸煙2個月組、吸煙4個月組表達減少但仍強于對照組，各組間兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義，P均<0.05。Western blot趨勢同

4、RT-PCR結果，從弱到強分別為（0.30±0.06、0.79±0.15、1.03±0.06、1.46±0.11），各組間兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義， P均<0.05。免疫組織化學染色結果顯示D4-GDI廣泛表達于除支氣管上皮細胞以外的各種肺組織細胞，4組間的表達強度變化趨勢為表達最弱的為對照組，其次是吸煙2個月組，吸煙4個月組D4-GDI表達最強，戒煙組較吸煙2個月組、吸煙4個月組表達減少但仍強于對照組，變化趨勢同Western blo

5、t結果一致。
　　2.細胞實驗部分：RT-PCR結果顯示10％CSE處理不同時間，隨著CSE處理時間的延長，D4-GDI的mRNA表達在0h組、3h組為（0.31±0.01、0.40±0.02），在12h組（0.69±0.05）最高，24h組（0.60±0.03）低于12h組但仍高于6h組（0.52±0.04），不同時間點組之間兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義，P均<0.05， Western blot結果顯示10%CSE處理不同時間，隨

6、著CSE處理時間的延長，D4-GDI的表達逐漸增高，分別為（0.44±0.06、0.78±0.08、1.11±0.12、1.37±0.07、1.65±0.13），在24h組最高，不同時間點組之間兩兩比較，均有統(tǒng)計學意義， P均<0.05，免疫熒光細胞化學染色檢測結果與Western blot結果一致。
　　【結論】：
　　吸煙導致D4-GDI在肺組織和RLE-6TN中表達增高，D4-GDI可能參與了吸煙相關性COPD的發(fā)病機