結(jié)核分枝桿菌Rv0901基因在恥垢分枝桿菌的克隆表達(dá)及其功能研究.pdf

1、為研究Rv0901基因的功能及其與結(jié)核桿菌毒力、致病機(jī)制的關(guān)系,我們首先將該基因528bp片段首次從基因組中擴(kuò)增出,并在原核融合表達(dá)載體pGEX-1λT中成功表達(dá)了GST-Rv0901融合蛋白,為研究該基因功能奠定了基礎(chǔ).經(jīng)過(guò)生物信息學(xué)分析及實(shí)驗(yàn)證實(shí)Rv0901為結(jié)核分枝桿菌毒力株特有的基因序列,將Rv0901基因片段通過(guò)穿梭表達(dá)載體pMV261經(jīng)電轉(zhuǎn)化重組入不含該基因序列的無(wú)毒恥垢分枝桿菌(mc<'2>155),并在重組恥垢分枝桿菌(

2、Rmc<'2>155)中成功表達(dá)了19kDa的Rv0901編碼蛋白.將經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)的重組恥垢分枝桿菌和未重組的恥垢分枝桿菌同時(shí)感染小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Ana-1,在不同的時(shí)間點(diǎn)計(jì)數(shù)存活的細(xì)胞數(shù)和細(xì)菌數(shù),發(fā)現(xiàn)兩菌株對(duì)細(xì)胞的活力均無(wú)明顯影響,巨噬細(xì)胞大量清除胞內(nèi)細(xì)菌,但重組株比未重組株在巨噬細(xì)胞中有一定存活優(yōu)勢(shì),被細(xì)胞清除速率較慢.進(jìn)而我們將感染了重組恥垢分枝桿菌和未重組恥垢分枝桿菌的Ana-1細(xì)胞通過(guò)膜聯(lián)蛋白V(Annexin-V)和碘化丙啶(