應(yīng)用消減雜交技術(shù)研究非小細(xì)胞肺癌基因表達(dá)譜的變化和TIG2基因生物學(xué)功能的研究.pdf

1、　　隨著人類基因組測序的逐步完成，功能基因組的研究成為今后的主要研究方向之一。本文采用消減雜交技術(shù)篩選與肺癌發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的功能基因，通過臨床病人肺癌組織與其癌旁正常組織基因表達(dá)譜的變化，構(gòu)建差異表達(dá)的cDNA文庫，經(jīng)測序和RT-PCR驗(yàn)證，篩選出與肺癌有重要貢獻(xiàn)的一組基因。本文從中選擇TIG2基因深入研究其對肺癌發(fā)生、發(fā)展的作用?！　恼７渭?xì)胞WI-38中克隆TIG2cDNA，通過體外構(gòu)建哺乳動物表達(dá)重組質(zhì)粒(pFLAG-CMV/

2、TIG2；pCI-neo/TIG2)，然后分別轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞(A2，LH7)，免疫熒光揭示TIG2編碼蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，且分泌出去。培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞(A2，LH7，BE1)經(jīng)維甲酸不同濃度處理，發(fā)現(xiàn)TIG2基因仍表達(dá)沉默，因此，肺癌細(xì)胞(A2，LH7，BE1)是維甲酸無應(yīng)答細(xì)胞；然后經(jīng)去甲基化試劑(5-Aza-CdR)處理后，發(fā)現(xiàn)TIG2基因獲得重新表達(dá)，因此，推斷TIG2基因在肺癌細(xì)胞中表達(dá)沉默與DNA甲基化有關(guān)，經(jīng)CpG島軟件預(yù)測