DNA甲基化抑制劑5-Azacytidine對(duì)豬LLC-PK1細(xì)胞GDF11表達(dá)的影響及豬GDF11的原核表達(dá).pdf

1、生長(zhǎng)分化因子11(GDF11)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)超家族中的一種分泌型信號(hào)分子，又稱為骨形態(tài)發(fā)生蛋白11(BMP11)。從1999年發(fā)現(xiàn)至今，對(duì)GDF11的研究主要集中于其在早期胚胎發(fā)育中的調(diào)控作用，特別是在中軸骨骼的圖式形成以及腎發(fā)生中的作用。體長(zhǎng)是豬育種中的一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性狀，其長(zhǎng)短與胸腰椎數(shù)密切相關(guān)。因此，研究DNA去甲基化對(duì)豬GDF11表達(dá)的影響，對(duì)于了解豬體長(zhǎng)變異的表觀遺傳機(jī)制，具有重要科學(xué)意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值。

2、 本研究可以分為兩個(gè)部分： 第一部分：用DNA甲基化抑制劑5-azaC處理豬腎近端小管上皮細(xì)胞系U~-PKl，提取細(xì)胞總RNA，運(yùn)用RT-PCR和半定量PCR的方法分析不同的處理濃度和處理時(shí)間對(duì)豬GDF11表達(dá)的影響。結(jié)果表明：處理24h后0.5、1和3uM5-azaC處理組之間GDF11的相對(duì)表達(dá)量差異顯著(P<0.05)；處理48h后差異不顯著；處理72h后，0.05、0.1、0.3、0.5、1和3μM 5-azaC處理

3、組之間差異顯著(P<0.05)。在每個(gè)處理濃度下，處理24、48和72h后GDF11的相對(duì)表達(dá)量差異極顯著(P<0.01)。 第二部分：根據(jù)GenBank公布的豬GDF11序列設(shè)計(jì)引物，利用來(lái)自6.5cm豬胚腎cDNA作為模板，通過(guò)PCR的方法克隆編碼豬GDF11蛋白羧基末端327個(gè)氨基酸的cDNA序列，將此序列連接入原核表達(dá)載體pGEX-6p-1中，測(cè)序驗(yàn)證表明重組質(zhì)粒pGEX-6p-1-GDF11構(gòu)建成功。將重組的表達(dá)質(zhì)粒p