甲基化抑制劑對白血病細胞中SHP-1、JAK3、TYK2基因表達的影響.pdf

1、目的：研究甲基化抑制劑對JAK-STAT信號轉導通路中JAK家族成員JAK3、TYK2和造血細胞磷酸酶SHP-1在白血病細胞株中的表達情況的影響，并探討它們在白血病發(fā)病中的作用。 方法：本試驗研究對象為慢性髓細胞白血病細胞株K562和白血病細胞株U937。將細胞懸浮培養(yǎng)于含10％熱滅活(56℃，30min)的小牛血清RPM11640培養(yǎng)基中。取對數(shù)生長期的細胞轉入培養(yǎng)板，每孔1×106/ml細胞。5-aza-CdR濃度為0.5、

2、1、2μmol/1(共3孔)，As2O3的濃度為1、2.5、5μmol/l(共3孔)，As2O3 1μmol/l+5-aza-CdR 0.5μmol/1、As2O32.5μmol/l+5-aza-CdR 1μmol/l、As2O3 5μmol/l+5-aza-CdR2μmol/l(各1孔)，不加藥物1孔。10種不同處理的細胞均各設2個復孔。細胞和藥物在37℃、5％CO2條件下孵育24h、48h、72h后收獲并洗滌，Trizol提取細胞總

3、RNA，熒光實時定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，RQ-PCR)檢測JAK3、TYK2及SHP-1的表達。 結果：1 SHP-1 mRNA在K562細胞中的表達：As2O3和5-aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸升高，有顯著差異，均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。2 JAK3 mRNA在K562細胞中的表達：As2O3和5-

4、aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸降低，有顯著差異，均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。3 TYK2 mRNA在K562細胞中的表達：As2O3和5-aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸降低，有顯著差異，均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。4 SHP-1mRNA在U937細胞中的表達：As2O3和5-aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸升高，有顯著差異，

5、均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。5 JAK3 mRNA在U937細胞中的表達：As2O3和5-aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸降低，有顯著差異，均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。6 TYK2 mRNA在U937細胞中的表達：As2O3和5-aza-CdR單獨作用及兩藥合用時，呈劑量及時間依賴性，其表達逐漸降低，有顯著差異，均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。7 SlIP-1、JAK3、TYK2三者之間相關性：