KLK5在乳腺癌中的表達(dá)及其靶向microRNA的預(yù)測(cè)和驗(yàn)證.pdf

1、目的：人組織激肽釋放酶基因家族(Kallikreins，KLKs)屬于絲氨酸蛋白酶家族，是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物家族，在許多惡性腫瘤中都有異常的表達(dá)。KLK5是KLKs的一個(gè)成員，人們對(duì)KLK5在乳腺癌中的表達(dá)情況的意見(jiàn)還存在分歧，且包括KLK5在內(nèi)的KLKs表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明確，我們通過(guò)本實(shí)驗(yàn)欲達(dá)到以下三個(gè)目的：首先，探討KLK5在乳腺癌當(dāng)中的表達(dá)情況；其次，尋找與KLK53’-UTR存在靶作用關(guān)系的microRNA，探討乳腺癌中

2、KLK5表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制；第三，探討與KLK5mRNA3’-UTR存在靶作用的microRNA在乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移方面的作用。
　　 方法：⑴應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、蛋白印跡(western-blot)對(duì)乳腺癌組織及其癌旁組織、乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231中KLK5表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。⑵應(yīng)用生物信息學(xué)方法，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道和其在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)情況對(duì)與KLK

3、5mRNA3’-非翻譯區(qū)(UTR)有靶作用關(guān)系的microRNA進(jìn)行初步篩選，然后應(yīng)用轉(zhuǎn)染相應(yīng)microRNA后檢測(cè)KLK5的方法和共轉(zhuǎn)染含KLK5mRNA3’-UTR的雙熒光素酶報(bào)告基因連同該microRNA后檢測(cè)相對(duì)熒光強(qiáng)度變化的方法對(duì)篩選出的microRNA進(jìn)行靶標(biāo)驗(yàn)證。⑶應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與KLK53’-UTR靶作用的microRNA對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。
　　 結(jié)果：①KLK5在乳腺癌組織中表

4、達(dá)低于癌旁組織，局部晚期癌中表達(dá)低于早期浸潤(rùn)癌，惡性程度高的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231中表達(dá)低于惡性程度低的MCF-7。②生物信息學(xué)方法篩選出十種與KLK5mRNA3’-UTR可能存在靶作用的microRNA并檢測(cè)其在MCF-7和MDA-MB-231中的表達(dá)，結(jié)果顯示只有miR-125b在MCF-7中表達(dá)低于MDA-MB-231，與KLK5在兩種細(xì)胞系中的表達(dá)情況相反；過(guò)表達(dá)miR-125b后可降低乳腺癌細(xì)胞中KLK5水平；共轉(zhuǎn)染

5、miR-125b和pmir-KLK5后可引起熒光強(qiáng)度的降低，但是對(duì)照組無(wú)此現(xiàn)象。③MCF-7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-125b可以使處于G1期的細(xì)胞比例增高，同時(shí)減弱細(xì)胞的劃痕修復(fù)能力。
　　 結(jié)論：⑴KLK5在乳腺癌癌組織和癌旁組織中表達(dá)存在差異且與腫瘤臨床分期及惡性程度有關(guān)，可作為判斷乳腺癌進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)。⑵miR-125b在MDA-MB-231中表達(dá)高于MCF-7，且經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和靶標(biāo)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-125b能夠靶作用