產腸毒素性大腸桿菌K-,99-菌毛蛋白的表達與免疫研究.pdf

1、產腸毒素性大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEc)是引起幼畜腹瀉的主要病原之一，該菌的致病性與其具有黏附素和產腸毒素密切相關。迄今，在幼畜的ETEC中發(fā)現(xiàn)的黏附素抗原有K<,88>、K<,99>、987P、F<,41>、F<,42>、。F<,165>、F<,17>、F<,18>等，而以K<,88>、K<,99>、987P、F<,41>最為流行。黏附素是一種具有良好免疫原性的蛋白質抗原，用帶有

2、黏附素的菌體或純化的黏附素抗原免疫動物均可以產生高效價的相應抗體。 本研究應用PCR方法從產腸毒素性大腸桿菌(ETEC)中擴增出不含信號肽序列的K<,99>菌毛蛋白基因(476bp)，將此基因片段克隆到原核表達載體pET-32a上，經(jīng)過酶切、PCR及DNA序列分析，篩選出重組質粒DNApET-32a-K<,99>，并在大腸桿菌BL21中獲得高效表達。鑒定表達的重組K<,99>融合蛋白(34kDa)經(jīng)鎳柱分離純化，獲得了高純度的純

3、化蛋白質，用純化的蛋白質免疫SPF新西蘭大白兔，獲得的抗血清可以標準的強毒株C<,83912>和免疫原發(fā)生特異性的抗原抗體反應，證明了重組蛋白質具有良好的免疫原性。 為了證明原核表達的K<,99>菌毛作為抗原的免疫保護性，此后，我們將K<,99>重組蛋白制成亞單位疫苗對動物的保護性作了初步的研究，以皮下多點注射免疫SPF級昆明系雄性/雌性小鼠，免疫后小鼠產生了特異性K<,99>菌毛蛋白的抗體，并在三免后達到較高水平。用致死劑量的