線粒體蛋白C1ORF102調(diào)控鼻咽癌能量代謝的分子機制研究.pdf

1、中南大學博士學位論文線粒體蛋白C1F102調(diào)控鼻咽癌能量代謝的分子機制研究姓名：向波申請學位級別：博士專業(yè)：疾病基因組學指導教師：李桂源20090501向波博士學位論文中文摘要程度表達。而在心臟、肝臟、脾臟、胃、腎臟、肺、結(jié)腸、胸腺、骨骼肌、胰腺以及表皮等組織中未檢測到陽性表達。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)，C10RFl02蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元中呈陽性，在膠質(zhì)細胞中沒有表達。該結(jié)果說明C10RFl02基因是一個新的組織特異性／選擇性基因。在研

2、究過程中還發(fā)現(xiàn)C10RFl02基因存在第二外顯子選擇性剪切。C10RFl02基因全長編碼389aa，選擇性剪切差異本編碼379aa，不包括第二外顯子。通過RTPCR結(jié)合測序的方法分析了C10RFl02基因全長及剪切差異本在人胚胎組織及多種細胞系中的分布，結(jié)果表明，C10RFl02全長(389aa)僅見于腦組織，而腦組織同時也表達編碼379aa的剪切本；鼻咽、氣管組織僅表達379aa剪切本；在永生化成人正常鼻咽上皮細胞系NP69及鼻咽癌細

3、胞系中表達的也是379aa差異本。前期研究發(fā)現(xiàn)在Hela細胞中瞬時轉(zhuǎn)染C10I江102表達質(zhì)粒，C10RFl02蛋白表達于線粒體。免疫熒光檢測表明NP69細胞中內(nèi)源性C10I強102蛋白與線粒體存在明顯共定位特征。隨后采用密度梯度離心方法分離NP69細胞線粒體和胞漿蛋白組分，Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性C10RFl02蛋白絕大部分定位于線粒體，且分子量較胞漿中的C10RFl02稍大，可能源于線粒體內(nèi)存在某種翻譯后修飾。上述結(jié)果表

4、明天然ClORFl02蛋白是一個線粒體蛋白。另外我們發(fā)現(xiàn)外源性穩(wěn)定表達的C10RFl02蛋白同樣主要定位于線粒體。免疫電鏡觀察發(fā)現(xiàn)在58F細胞中瞬時轉(zhuǎn)染mycC10RFl02蛋白定位于線粒體?！綜10RFl02在鼻咽癌中表達下調(diào)，轉(zhuǎn)染ClORFl02抑制5—8F細胞生長與增殖，逆轉(zhuǎn)5—8F細胞對缺氧的耐受能力】通過realtimeRTPCR、Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)C1ORF102基因mRNA及蛋白在鼻咽癌細胞系(HNEl、HNE