上調(diào)miR-21對HT-29細胞生物學行為及對5-FU和放療敏感性影響.pdf

1、目的:研究miR-21對大腸癌HT-29細胞生物學行為的影響，觀察細胞對5-Fu及放射線敏感性的變化。
　　方法:轉(zhuǎn)染pre-miR-21慢病毒組為實驗組，HT-29細胞組為空白對照組，轉(zhuǎn)染無義序列NC慢病毒和U6慢病毒為陰性對照組。構(gòu)建pre-miR-21慢病毒載體，熒光顯微鏡下評估轉(zhuǎn)染情況，Taqman Real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染前后miR-21表達變化，采用CCK-8法檢測miR-21對細胞增殖能力影響，流式細胞儀檢

2、測細胞轉(zhuǎn)染前后細胞周期分布情況及凋亡能力，細胞克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力，Transwell小室法觀察細胞體外侵襲力。CCK-8法檢測細胞對5-FU化療敏感性變化，并計算各組半數(shù)抑制率(IC50)，MMT法檢測細胞對放療敏感性。每項實驗至少重復(fù)3次。
　　結(jié)果:實時熒光定量PCR結(jié)果顯示pre-miR-21慢病毒組miR-21表達升高4.228倍(p＜0.01）。與空白對照組和兩組陰性對照組相比，上調(diào)miR-21表達明顯促進

3、HT-29細胞增殖(p＜0.01);克隆形成能力顯著增強(559±19 vs375.67±21.01p＜0.01);細胞凋亡減少(p＜0.05)，早期凋亡（1.1±0.26 vs6.67±0.81）％，晚期凋亡和死亡細胞（1.33±0.85 vs5.53±1.1）％;細胞周期重新分布，G0/G1期向S期轉(zhuǎn)換，G0/G1期細胞比例明顯降低（36.53±0.92 vs60.18±0.93）％(p＜0.01)，S期細胞比例升高（56.8±1.

4、02 vs33.0±1.01）％(p＜0.01)，G2/M期細胞比例無差異;細胞體外侵襲能力增強（穿膜細胞數(shù)104.8±6.72 vs34.2±2.59，p＜0.01）;miR-21抵消部分5-FU化療作用使化療敏感性降低，上調(diào)組IC50（232.73±21.69μg/ml）是空白對照組（112.46±15.26μg/ml）的2.07倍(p＜0.01)，細胞對X線放療抑制率降低（16.76±1.87 vs36.14±1.54）％(p＜0