發(fā)展檢測(cè)腸病毒71型(EV71)感染之單克隆抗體研究.pdf

1、目的：作為現(xiàn)今最為流行的嗜神經(jīng)性病毒之一，腸病毒71型（enterovirus type71, EV71）近年來(lái)在亞太地區(qū)頗為盛行，引起各國(guó)政府高度重視。本課題旨在制備獲得抗EV71單克隆抗體，鑒定并分析其應(yīng)用及生物學(xué)功能，以探討其于臨床診斷治療及抗病毒天然物篩選等方面的應(yīng)用。
　　方法：以EV71 Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠，采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合，以EV71感染之RD（Human Rh

2、abdomyosarcoma，人橫紋肌肉瘤）細(xì)胞作為抗體篩選細(xì)胞，經(jīng)IFA（Immunofluorescence assay，免疫熒光）反復(fù)篩選及克隆化培養(yǎng)，最終得到能夠穩(wěn)定分泌抗EV71單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，并對(duì)其抗體亞型及特異性進(jìn)行鑒定。對(duì)各株抗體在FCM（flow cytometry，流式細(xì)胞）、Western blot、capture-ELISA（抗原捕獲ELISA）、病毒中和等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行分析，并通過(guò)peptide

3、-ELISA（肽段-ELISA）鑒定得各自相應(yīng)抗原識(shí)別表位。應(yīng)用所得抗體進(jìn)行病毒檢測(cè)及天然萃取物抗病毒功效鑒定。
　　結(jié)果：（1）共篩選得到5株能夠分泌抗EV71單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27。除mAb26亞型為IgM,κ外，其余均為IgG2a,κ；（2）5株單克隆抗體，均可特異性識(shí)別EV71病毒，而不與CVA16（柯薩奇病毒A組16型）病毒、ECHO6（?？刹《?型

4、）病毒交叉反應(yīng)；（3）抗體均可應(yīng)用于IFA、FCM、Western blot、capture-ELISA等實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行EV71的檢測(cè)及鑒定；（4）mAb22及mAb24具有EV71病毒中和作用；（5）除mAb27結(jié)合的抗原決定表位為病毒VP1的N-端線性表位：DVIESSIGDSVSRAL外，mAb21、mAb22、mAb24和mAb26均識(shí)別位于VP1的構(gòu)象型抗原決定表位；（6）抗體可用于天然萃取物抗病毒功效鑒定等相關(guān)研究。