毒素清顆?？箖?nèi)毒素引起小腸損傷的實驗研究.pdf

1、本文研究目的：擬通過動物實驗揭示內(nèi)毒素介導小腸損傷的分子生物學機制、毒素清顆粒保護內(nèi)毒素引起小腸損傷的作用及分子生物學機制。 研究方法：健康雄性日本大耳白兔36只(n=36)，隨即分為正常組、模型組、毒素清大劑量組、毒素清中劑量組、毒素清小劑量組，雙黃連對照組。各組6只。實驗前1天、造模前2小時及造模后30分鐘，正常組和模型組分別灌胃同等體積的生理鹽水，用藥組分別灌胃毒素清(5.04g·kg-1·d-1、2.52g·kg-1·d

2、-1、1.26g·kg-1·d-1)、雙黃連(2.8ml·kg-1·d-1)。內(nèi)毒素性小腸損傷模型采用耳緣靜脈注射精制內(nèi)毒素(60μg/Kg)。造模后5小時后取材。測定外周血中性粒細胞、白細胞計數(shù)、細胞因子TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平；測定小腸組織含水量；測定小腸內(nèi)容物中sIgA水平；采用免疫組織化學測定巨噬細胞、ICAM-1、VCAM-1和TNF；采用原位雜交技術(shù)測定MIP-2mRNA表達水平。 研究結(jié)果：

3、 1、在注射內(nèi)毒素后模型組、毒素清組、雙黃連組動物體溫皆有升高，模型組最高。模型組△T和TRI和正常組對比(P＜0.01)，而毒素清中劑量組和模型組相比(P＜0.05，P＜0.01)。 2、在注射內(nèi)毒素后模型組、毒素清組、雙黃連組動物呼吸加快，1小時時達到峰值，心率在1、3、5小時呈進行增加，和正常組比較模型組在每個時間點的變化最為顯著，和模型組對比毒素清和雙黃連組在每個時間點均能顯著逆轉(zhuǎn)呼吸和心率的變化，而毒素清和雙黃連組

4、之間無明顯差異。 3、六組動物在造模前白細胞和中性粒細胞計數(shù)均無顯著性差異，而且空白對照組各時點白細胞和中性粒細胞計數(shù)之間無顯著性差異。模型組外周血WBC和PMN計數(shù)在60min處開始明顯降低，與空白對照組相比差異顯著，且恢復緩慢，在實驗5h仍低于實驗前水平。毒素清組雙黃連組計數(shù)變化趨勢介于空白對照組和模型組，而且毒素清大、中劑量組在實驗后5h達到略高于實驗前的水平。 4、與對照組相比，模型組家兔小腸組織濕/干重比(P＜

5、0.05)、腸內(nèi)容物sIgA水平降低(P＜0.01)、血清中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平(P＜0.01)顯著升高，而毒素清組各項指標均較內(nèi)毒素組減輕，腸內(nèi)容物sIgA水平升高，大劑量作用更顯著。 5、正常組腸形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，模型組可見腸黏膜充血水腫或腸絨毛萎縮及上皮表淺壞死，伴上皮脫落，炎癥細胞浸潤，以中性粒細胞為主，有些絨毛完全缺失，腸腔可見炎癥細胞或積液，腺體間質(zhì)見大量炎癥細胞。而毒素清組結(jié)構(gòu)基本正常。較模型組

6、癥狀顯著改善。 6、模型組小腸組織中TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、巨噬細胞表達水平明顯高于空白對照組(均P＜0.01)，主要分布在固有層、腺體間質(zhì)、肌層、血管等組織的胞漿和胞膜上，經(jīng)毒素清處理后顯著降低。 7、與對照組相比，內(nèi)毒素組小腸組織中MIP-2表達明顯上調(diào)(P＜0.01)，主要表達在固有層、腺體間質(zhì)、肌層、血管等組織細胞漿內(nèi)，和模型組對比毒素清高劑量和中劑量組可以降低其表達(P＜0.01)。 研

7、究結(jié)論： 1、內(nèi)毒素能引起兔發(fā)熱、呼吸心率加快、等一系列全身反應(yīng)。 2、內(nèi)毒素可通過激活單核細胞和巨噬細胞釋放多種炎性介質(zhì)TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、MIP-2，參與機體的免疫炎癥反應(yīng)，引起小腸損傷3、毒素清能對抗內(nèi)毒素引起的全身反應(yīng)。 4、毒素清能抑制內(nèi)毒素對單核細胞和巨噬細胞的激活作用，減少TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、MIP-2的釋放，減輕小腸免疫炎性反應(yīng)，從而減輕小腸損傷。