促?；鞍讓?duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響.pdf

1、目的：
　　觀察不同類型、不同濃度的游離脂肪酸對(duì)3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞在胰島素刺激狀態(tài)和ASP刺激狀態(tài)下胰島素經(jīng)典信號(hào)通路(IRS-1,PI3K)蛋白表達(dá)的影響,以及脂代謝關(guān)鍵酶(LPL,HSL,Perilipin,DGAT)基因水平及蛋白表達(dá)的影響,以探討ASP對(duì)脂肪細(xì)胞糖脂代謝的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：
　　1、采用經(jīng)典的激素“雞尾酒”(10μg/ml胰島素+0.5mmol/L1-甲基3-異丁基黃嘌呤+1.0μmo

2、l/L地塞米松)誘導(dǎo)方法,誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞,顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞及脂肪細(xì)胞形態(tài),油紅O染色觀察胞漿內(nèi)脂滴聚集。
　　2、WesternBlot方法檢測(cè)ASP和INS刺激下脂肪細(xì)胞HSL,Perilipin,IRS-1,PI3K蛋白表達(dá)水平。
　　3、Real-timePCR方法定量檢測(cè)ASP刺激下脂肪細(xì)胞LPL,HSL,Perilipin,DGAT基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

3、r>　　1、顯微鏡下觀察3T3-L1前脂肪細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣的長(zhǎng)梭形,胞漿中無脂滴;分化成熟后,細(xì)胞呈大圓形,胞漿內(nèi)可見大量脂滴包繞胞核,呈“戒環(huán)”狀。
　　2、INS和ASP作用于對(duì)照組(0mmol/L)和刺激組(1.0mmol/L)的游離脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,結(jié)果示:1.0mmol/L油酸和棕櫚酸孵育過夜后,INS刺激和ASP刺激下顯著增加成熟脂肪細(xì)胞HSL和Perilipin蛋白的表達(dá)。與對(duì)照組比(無F

4、FA刺激),油酸組增加1.75倍(p<0.01)INS刺激狀態(tài)和76％(p<0.05)ASP刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞HSL蛋白的表達(dá)。棕櫚酸組增加85%(p<0.01)INS刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞HSL蛋白的表達(dá)。油酸和棕櫚酸還增加INS刺激狀態(tài)1.27倍(p<0.01)和96%(p<0.05)脂肪細(xì)胞perilipin蛋白的表達(dá),以及86%(p<0.05)INS刺激狀態(tài)下和76%(p<0.05)ASP刺激狀態(tài)下perilipin蛋白表達(dá)。<

5、br>　　1.0mmol/L油酸和棕櫚酸孵育過夜后,INS和ASP刺激下顯著增加成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白的表達(dá)。與對(duì)照組相比(無FFA刺激),油酸和棕櫚酸組分別增加2.59倍(p<0.01)和3.66倍(p<0.01)INS刺激狀態(tài)成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白的表達(dá),棕櫚酸增加1.27倍(p<0.01)ASP刺激狀態(tài)下PI3K蛋白表達(dá)。
　　與此相對(duì),INS和ASP刺激均未能顯著增加成熟脂肪細(xì)胞IRS-1蛋白的表達(dá)。
　　而與I

6、NS刺激組相比,ASP組均未能顯著增加成熟脂肪細(xì)胞PI3K蛋白、perilipin蛋白、HSL蛋白及perilipin蛋白的的表達(dá)(P>0.05)。
　　3、ASP作用于不同濃度(0.125、0.5、1.0mmol/L)的游離脂肪酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,結(jié)果示:ASP可以從不同程度上增加脂代謝關(guān)鍵酶HSL、LPL、Perilipin和DGAT基因的表達(dá)。
　　與空白對(duì)照組相比,ASP刺激下,0.5mmol/L

7、與1.0mmol/L油酸組HSL基因表達(dá)顯著升高5倍和3.26倍(p<0.01),0.5mmol/L與1.0mmol/L棕櫚酸組HSL基因表達(dá)顯著升高1.98倍和1.87倍(p<0.05)。
　　ASP刺激下,0.125mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比降低了41%(p<0.05),0.5mmol/L與1.0mmol/L油酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升

8、高1.87倍和2.98倍(p<0.01)。而對(duì)不同濃度棕櫚酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞LPL基因表達(dá)無明顯影響(p>0.05)。
　　ASP作用于0.5mmol/L和1.0mmol/L的油酸孵育的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞,其perilipin基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升高6.87倍和5.46倍(p<0.01)。而僅對(duì)0.125mmol/L濃度的棕櫚酸的分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞perilipin基因表達(dá)降低27%(

9、p<0.05),0.5mmol/L與1.0mmol/L棕櫚酸組則無明顯影響(p>0.05)。
　　ASP作用下,0.5mmol/L與1.0mmol/L油酸組DGAT基因表達(dá)均有分別升高2.5倍和2倍(p<0.01)。三種不同濃度(0.125、0.5、1.0mmol/L)棕櫚酸孵育的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞DGAT基因表達(dá)與空白對(duì)照組相比分別升高3.81倍、4.63倍和2.53倍(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　在脂肪