人類激酶基因CK1γ1L2和PDIK1L的克隆和功能研究.pdf

1、蛋白激酶是催化蛋白質(zhì)磷酸化的酶,它們?cè)诩?xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用.蛋白激酶可以分為絲/蘇氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶.酪蛋白激酶是廣泛存在于真核生物的絲/蘇氨酸蛋白激酶,包括CK1和CK2兩大亞類.其中CK1是發(fā)現(xiàn)較早的,哺乳動(dòng)物的CK1發(fā)現(xiàn)有α、β、γ、δ和ε5個(gè)亞家族,CK1γ亞家族目前發(fā)現(xiàn)有CK1γ1、CK1γ2和CK1γ3三個(gè)成員.還有一種既能催化絲/蘇氨酸殘基磷酸化又能催化酪氨酸殘基磷酸化的激酶,這種具有雙底物特異性的激酶稱為

2、雙特異性蛋白激酶.我們從胎腦cDNA文庫(kù)克隆得到兩條人類的新激酶基因:CK1γ1L2和PDIK1L.CK1γ1L2為酪蛋白激酶CK1γ1的一個(gè)新的剪切體,該基因全長(zhǎng)1756bp,編碼含438個(gè)氨基酸殘基的蛋白,其核苷酸序列和氨基酸序列大鼠CK1γ1基因相比分別為93﹪和94﹪的同源性.CK1γ1L2定位于人染色體15q22.31,包含11個(gè)外顯子.亞細(xì)胞定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)CK1γ1L2定位于細(xì)胞核中.Northern和Panel表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)

3、該基因分布于腦、肝、脾、外周血白細(xì)胞、腎、肺、小腸、卵巢、睪丸和前列腺中,在心和骨骼肌組織也可能有表達(dá),另外CK1γ1L2在卵巢癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌和乳腺癌中也檢測(cè)到顯著表達(dá).PDIK1L基因全長(zhǎng)4301 bp,編碼含有341個(gè)氨基酸殘基的蛋白.通過(guò)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)它的蛋白與絲/蘇氨酸激酶和骼氨酸激酶催化功能域同源性較高,有可能是個(gè)雙特異性激酶.PDIK1L與人激酶CLIK1蛋白同源性為69﹪.CLIK1是PDZ-LIM蛋白CL

4、P-36的相關(guān)激酶,經(jīng)HUGO基因命名委員會(huì)核準(zhǔn),將其命名為PDIK1L,即類PDLIM1相關(guān)激酶1(PDLIM1 interacting kinase 1 like).該基因定位于人染色體1p36.11.包含4人外顯子.亞細(xì)胞定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)PDIK1L也定位在細(xì)胞核中.Panel表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)該基因廣泛表達(dá)于多種組織,只是不同區(qū)域的基因序列表達(dá)存在差異,除了在胰腺、前列腺、胸腺和脾中表達(dá)之外,PDIK1L基因中段第1781~2200區(qū)域

5、還可在外周血白細(xì)胞、結(jié)腸、小腸、卵巢和睪丸中檢測(cè)到表達(dá),而3'端附近的第3296~3724區(qū)域可在肝、腎、心、腦和胎盤(pán)中檢測(cè)到表達(dá),這有可能是因?yàn)镻DIK1L基因存在不同轉(zhuǎn)錄本所致,或許與該基因在生物體內(nèi)的功能相關(guān).激酶的活性測(cè)定發(fā)現(xiàn)PDIK1L蛋白具有絲/蘇氨酸激酶活性.經(jīng)酵母雙雜交篩選人胎腦文庫(kù)并經(jīng)免疫共沉淀驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)PDIK1能與GRINL1A(類離子型谷氨酸NMDA受體1A)相互作用.GRINL1A是近幾年發(fā)現(xiàn)的谷氨酸受體家庭的