人類基因SEC15L3和SEC14L3的克隆與功能研究.pdf

1、本論文分兩部分，分別研究了人類exocyst復合體一個重要亞基基因SECl5L3和與膽固醇合成相關基因SEC14L3的初步生物學功能。 在真核生物細胞中保守的exocyt復合體是介導胞吐作用(exocytosis)的關鍵元件，而Sec15蛋白(Sec15p)是exocyst與其他蛋白及膜結構結合的中介。在哺乳動物細胞中Sec15p與眾多的不同蛋白結合，使得exocyst可能在內吞作用，細胞周期及細胞骨架形成等過程中也起作用。我

2、們從人胎腦cDNA文庫中克隆到一條新的See15基因(SEC15L1，NM-019053)的剪接體cDNA——SEC15L3，并已提交GenBank，登錄號為EF571007。逆轉錄PCR和熒光定量實驗顯示，該基因在胰腺，脾臟，胸腺，前列腺，和睪丸幾個組織表達量較高，而且與其剪接體SECl5L，的組織表達譜有明顯差異。生物信息學方法模擬SEC15L3蛋白，并與SEC15L1比較，顯示兩者有不同的高級結構，我們推測兩者可能是不同exocy

3、st的成分，并且在不同組織中行使不同功能。 SEC14L3的cDNA全長2082bp，編碼一個長度為400個氨基酸殘基的蛋白質。蛋白序列分析顯示SEC14L3具有兩個功能結構域：CRAL-TRIO和GOLD結構域。信息學分析顯示SEC14L3與TAP/SPF(α-生育酚關聯蛋白/上清蛋白因子)同源，可能為TAP/SPF蛋白家族的新成員。TAP/SPF在體內參與調節(jié)膽固醇合成與α生育酚代謝這兩條重要的生理途徑，提示SEC14L3

4、可能具有類似的功能。綠熒光融合蛋白表達顯示SEC14L3定位在細胞質內而GOLD結構域可能介導其準確定位。真核表達SEC14L3及其系列突變體蛋白顯示SEC14L3能夠促進肝癌細胞株7721的膽固醇合成，而且CRAL-TRIO和GOLD結構域及某些重要氨基酸殘基對這種促進作用是必需的。α生育酚刺激實驗顯示SEC14L3的亞細胞定位及對膽固醇合成的促進作用均不受α生育酚刺激的影響。我們還提出了SEC14L3促進膽固醇合成的可能途徑及后續(xù)可