骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7及其受體在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟的表達(dá)及延腎膠囊干預(yù)實驗.pdf

1、目的：觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7及其受體(BMPR-Ⅱ，ALK-2，ALK-3，ALK-6)在單側(cè)輸尿管梗阻誘導(dǎo)的腎間質(zhì)纖維化大鼠模型中的表達(dá)變化及其意義，同時在以前研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討延腎膠囊延緩腎纖維化的作用及其機(jī)理。 方法：清潔級雄性成年大鼠80只隨機(jī)分為四組：(1)正常對照組(N)：大鼠不接受任何手術(shù)和治療；(2)假手術(shù)組(S)：大鼠手術(shù)剖腹后僅游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎，同時術(shù)前一天開始每日給以安慰劑生理鹽水灌胃治療；(3)

2、單側(cè)輸尿管梗阻組(U)：大鼠行手術(shù)剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎左側(cè)輸尿管，同時術(shù)前一天開始每日給以安慰劑生理鹽水灌胃處理；(4)延腎膠囊治療組(T)：大鼠行手術(shù)剖腹，分離并結(jié)扎左側(cè)輸尿管，同時術(shù)前一天開始每日予以延腎膠囊灌胃治療。在術(shù)后1、3、7、14天，每組取5只大鼠處死，取左側(cè)腎臟行各項指標(biāo)檢測，以免疫組織化學(xué)方法檢測腎組織中BMP-7、TGF-β1及α-SMA蛋白的表達(dá)水平，以逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)技術(shù)檢測BMP-7及其受體BMPR-Ⅱ

3、、ALK-2、ALK-3、ALK-6的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：正常對照組及假手術(shù)組，BMP-7蛋白高度表達(dá)，主要分布在腎小管及腎間質(zhì)，在腎小管髓攀升支、遠(yuǎn)曲小管、集合管均有表達(dá)，近曲小管僅有少量表達(dá)，而腎小球內(nèi)基本無表達(dá)；TGF-β1偶見于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，主要在近曲小管表達(dá)，腎小球、腎間質(zhì)及腎血管內(nèi)均未見表達(dá)；α-SMA僅在血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)，腎小球及腎小管腎間質(zhì)中均未見表達(dá)；RT-PCR結(jié)果顯示，BMP-7、BMPR-

4、Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6mRNA均有高度表達(dá)。在單側(cè)輸尿管梗阻組隨著梗阻時間延長腎間質(zhì)損害逐漸加重，BMP-7蛋白表達(dá)呈進(jìn)行性下降趨勢，而TGF-β1、α-SMA隨梗阻時間延長表達(dá)進(jìn)行性增加；BMP-7蛋白表達(dá)于術(shù)后1天即明顯下調(diào)，隨梗阻時間延長減弱程度更明顯，第14天表達(dá)量最弱，幾乎沒有明顯的陽性表達(dá)；TGF-β1于術(shù)后1天即在腎間質(zhì)內(nèi)有輕微表達(dá)，腎小管上皮細(xì)胞胞漿中表達(dá)較對照組增多，且隨梗阻時間延長而進(jìn)行性增加，術(shù)后1

5、4天表達(dá)最強(qiáng)，但各時相點(diǎn)腎小球均無明顯TGF-β1表達(dá)；α-SMA于術(shù)后第3天在腎間質(zhì)中表達(dá)，術(shù)后第7天表達(dá)明顯增加，腎小管上皮細(xì)胞亦有大量表達(dá)，術(shù)后14天α-SMA表達(dá)仍然維持在較高水平，但各時相點(diǎn)腎小球均無明顯α-SMA表達(dá)變化；RT-PCR結(jié)果顯示術(shù)后24h，BMP-7、BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3mRNA即有明顯下調(diào)，隨梗阻時間延長而逐漸降低，第14天最低，幾乎沒有表達(dá)；而各時相點(diǎn)ALK-6mRNA表達(dá)水平與對照組相比，

6、無明顯差別；相關(guān)分析表明BMP-7與TGF-β1和α-SMA蛋白表達(dá)陽性面積成顯著負(fù)相關(guān)。在治療組，與輸尿管梗阻組同一時相點(diǎn)相比，腎間質(zhì)損害程度減輕，且BMP-7蛋白表達(dá)水平有所提高，TGF-β1、α-SMA表達(dá)水平則有所下降，BMP-7及其受體mRNA表達(dá)水平有所提高。 結(jié)論：(1)在正常腎臟中有著豐富的BMP-7及其受體表達(dá)，主要表達(dá)在腎小管腎間質(zhì)，而腎小球幾乎沒有表達(dá)，髓質(zhì)區(qū)表達(dá)明顯高于皮質(zhì)區(qū)表達(dá)。(2)BMP-7及其受體