促紅細胞生成素對改善新生豬胰島細胞活性的實驗研究.pdf

1、本實驗?zāi)康模?．研究促紅細胞生成素在體外對新生豬胰島細胞增殖和功能的影響。2．研究促紅細胞生成素干預(yù)后，體外培養(yǎng)的新生豬胰島細胞凋亡及bcl-2、bax、caspase-3基因表達的改變。 方法：新生3-5天小豬，取胰、分離、純化，檢測胰島細胞的純度和活性。獲得的新生豬胰島細胞分為實驗組和對照組，實驗組與促紅細胞生成素共孵育，培養(yǎng)5-7天，細胞計數(shù)繪制生長曲線；MTT法測細胞增殖活性；葡萄糖刺激試驗檢測胰島功能；流式細胞儀和EB

2、／AO熒光染色檢測凋亡率；流式細胞儀分析細胞周期；RT-PCR法檢測胰島細胞PDX-1、GlUT-2、bcl-2、bax、caspase-3基因mRNA的表達。 結(jié)果：經(jīng)促紅細胞生成素處理5-7天后，實驗組新生豬胰島細胞數(shù)目比對照組增多(P<0.01)，低糖、高糖刺激的胰島素分泌水平與對照組無差別(P>0.05)，流式細胞儀和EB／AO熒光染色檢測的調(diào)亡率較對照組顯著降低(P<0.001)，RT-PCR的結(jié)果顯示實驗組PDX-l

3、mRNA表達較對照組稍有上調(diào)(P<0.05)，G1UT-2mRNA表達無明顯改變(P>0.05)，bcl-2mRNA較對照組明顯增強(P<0.001)，而baxmRNA和caspase-3 mRNA明顯減弱(P<0.01)。 結(jié)論： 1．促紅細胞生成素有可能促進新生豬胰島細胞的體外增殖分化，但對細胞的功能沒有影響。 2．促紅細胞生成素對體外培養(yǎng)的新生豬胰島細胞有抗凋亡作用，可能通過上調(diào)抗凋亡基因bcl-2，