CD40信號(hào)通過(guò)TNFRI途徑抑制肺癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：CD40活化信號(hào)可抑制多種腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)，但其分子機(jī)制尚不明確，本研究旨在探討激發(fā)CD40信號(hào)對(duì)人肺癌細(xì)胞株的增殖及腫瘤壞死因子受體(TNFR)、膜型了NF-α(mTNF-α)表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制。 方法：以人肺癌細(xì)胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1為研究對(duì)象，以激發(fā)型抗CD40單克隆抗體(5C11)激發(fā)肺癌細(xì)胞的CD40信號(hào)，采用免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肺癌細(xì)胞表面CD40的表達(dá)以及激發(fā)CD40對(duì)細(xì)胞表

2、面TNFR和mTNF-α表達(dá)譜的影響；Western blot檢測(cè)激發(fā)CD40對(duì)細(xì)胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表達(dá)的影響；采用四氮唑鹽(MTT）比色法抗體中和實(shí)驗(yàn)分析阻斷TNF信號(hào)對(duì)CD40激發(fā)效應(yīng)的影響；酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)激發(fā)CD40對(duì)肺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中可溶性TNF-α(sTNF-α)含量的影響。 結(jié)果：(1)肺癌細(xì)胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1表面CD40表達(dá)率分別為(89±3.2)％、 (

3、62.2±4.5)％、 (2.3±0.4)％。(2)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)示，激發(fā)CD40可使NCI-H460和A549細(xì)胞表面TNFRI表達(dá)率上調(diào)(P<0.05)，TNFRII和mTNF-α表達(dá)率下調(diào)(P<0.05)。 (3)Western blot示，激發(fā)CD40可使NCI-H460和A549細(xì)胞TNFRI蛋白表達(dá)增強(qiáng)，TNFRII蛋白表達(dá)減弱，而mTNF-α蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化。(4)激發(fā)CD40對(duì)SPC-A-1的TNFR、mTNF-

4、α表達(dá)無(wú)影響(P>0.05)。 (5)CD40激發(fā)前后肺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清中末檢測(cè)到sTNF-α的存在。(6)激發(fā)CD40能明顯抑制NCI-H460、A549細(xì)胞的增殖(P<0.05)，而對(duì)SPC-A-1的增殖無(wú)影響。 (7)阻斷TNFRI及TNF-α后激發(fā)CD40引起的細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)消失。 結(jié)論：激發(fā)CD40可抑制CD40表達(dá)陽(yáng)性肺癌細(xì)胞A549和H460體外增殖，并引起其TNFR、mTNF-α表達(dá)變化，而阻斷TNF信號(hào)后使激發(fā)