CYP4502C9和VKORC1的基因多態(tài)性及其他因素與華法林劑量的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：華法林(warfarin)是廣泛用于臨床的一種口服抗凝藥，常以消旋混合物形式用于抗凝治療。長久以來一直以其臨床個(gè)體化用量差異較大、狹小的治療范圍和抗凝的過量而引發(fā)的嚴(yán)重并發(fā)癥而困擾著臨床醫(yī)生。華法林在體內(nèi)是被不同的CYP同工酶通過羧基化而代謝成非活性產(chǎn)物的。華法林的代謝是具有構(gòu)象選擇性，S-華法林和R-華法林分別通過不同的酶在不同的位點(diǎn)進(jìn)行識(shí)別并經(jīng)羧基化而生成不同的代謝產(chǎn)物。目前已證實(shí)在人的肝臟，抗凝作用更強(qiáng)的S-對(duì)映體85％以上

2、經(jīng)由CYP2C9代謝轉(zhuǎn)化為無活性的6-和7-羥化產(chǎn)物。目前，影響華法林代謝的基因熱點(diǎn)集中在CYP2C9。華法林作為維生素K拮抗劑通過阻斷維生素K還原，使得含有谷氨酸殘基的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，以及蛋白C和蛋白S停留在沒有抗凝血生物活性的前體階段。這類蛋白與氧化失活的維生素K結(jié)合，進(jìn)一步阻礙維生素K環(huán)氧化物由環(huán)氧型向氫醌型轉(zhuǎn)變。氫醌型維生素K必須通過環(huán)氧型維生素K被還原才能使維生素K依賴性凝血因子前體被持續(xù)羧化成有活性的凝血因子。體內(nèi)環(huán)

3、氧型維生素K被還原為氫醌型維生素K由維生素環(huán)氧化物還原酶復(fù)合體(VKORC)完成，VKORC是維生素K依賴性凝血因子生成的限速酶。華法林主要是抑制該酶而產(chǎn)生作用。目前，對(duì)華法林作用機(jī)制影響的基因研究熱點(diǎn)集中在VKORC。本課題采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragmentlength polymorphism，PCR-RFLP)技術(shù)，對(duì)我國河北地區(qū)漢族

4、人群的CYP450 2C9 *3+1075C/A和VKORC1-1639A/G的多態(tài)性分布進(jìn)行調(diào)查，并探討其多態(tài)性與華法林劑量的關(guān)系。 方法： 1隨機(jī)選取2006年4月～2006年7月在河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院門診體檢的健康人487例，均為河北省漢族人、無血緣關(guān)系。 2所有入選者均采集外周血2ml。應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測其CYP450 2C9 *3+1075C/A和VKORC1-1639A/G基因型和基因分

5、布頻率。 3選取自2006年4月～2007年12月在河北醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科、呼吸內(nèi)科、心外科服用華法林達(dá)穩(wěn)定劑量的患者101例，均為河北省漢族人、無血緣關(guān)系，均排除了充血性心力衰竭，肝功能不全，口服其它干擾性藥物。 4.所有入選者均采集外周血2ml。應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測其CYP450 2C9 *3+1075C/A和VKORC1-1639A/G基因型和基因分布頻率，并結(jié)合其個(gè)體差異和華法林的穩(wěn)定劑量進(jìn)行分析

6、。 結(jié)果： 1.檢測487名正常人CYP450 2C9 *3+1075C/A基因型，發(fā)現(xiàn)AA型為449例(92.2％)，AC型36例(7.4％)，CC型2例(0.4％)；VKORC1-1639A/G基因型：發(fā)現(xiàn)AA基因型為415例(85.2％)，GA型72例(14.8％)，未發(fā)現(xiàn)GG型(0.0％)；均符合Hardy-weinberg遺傳平衡定律(P>0.05)。 2.服用華法林的101名患者的CYP450 2C9

7、 *3+1075C/A基因型：發(fā)現(xiàn)AA型為93例(92.08％)，AC型8例(7.92％)，未發(fā)現(xiàn)CC型(0.00％)；VKORC1-1639A/G基因型：發(fā)現(xiàn)AA基因型為87例(86.14％)，GA型14例(13.96％)，未發(fā)現(xiàn)GG型(0.00％)；均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P>0.05)。 3.正常人群組與服用華法林藥物組基因型在CYP450 2C9 *3+1075C/A(P=0.926)和VKORC

8、1-1639A/G(P=0.812)突變上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.各地區(qū)人群的CYP450 2C9 *3+1075C/A突變率與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較。結(jié)果示：本次實(shí)驗(yàn)487名正常人群和101名服用華法林的患者的總體CYP450 2C9 *3+1075C/A突變率與我國人群、北京漢族人群、我國廣東人群無明顯差異；與韓國和日本人無明顯差異；與我國新疆維吾爾族人群、美國、俄羅斯、意大利、瑞士和土耳其人有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P<0.05)。各地區(qū)人

9、群的VKORC1-1639A/G突變率與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較。結(jié)果示：本次實(shí)驗(yàn)487名正常人群和101名服用華法林的患者的總體VKORC1-1639A/G突變率與我國新疆漢族和我國臺(tái)灣人群無明顯差異；與日本人、新加坡人無明顯差異；與馬來西亞人、西班牙人有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P<0.05)；與印度人、美國人、英國人、法國人、高加索人有明顯差異(P<0.01)。 5.服用華法林的患者中，以INR維持2.0～3.0為靶劑量，P450 2C9

10、*1/*1基因型的患者華法林維持量為3.11±0.76(mg/d)，而P450 2C9 *1/*3基因型的患者華法林維持量為2.21±0.60(mg/d)，兩者間的差異有顯著性(P=-0.002)。VKORC1AA基因型的患者華法林維持量為2.91±0.67(mg/d)，而VKORC1GA基因型的患者華法林維持量為3.86±0.95(mg/d)，兩者間的差異亦有顯著性(P=0.000)。6.采用多元逐步回歸得出有關(guān)華法林穩(wěn)定劑量的方程：

11、ln(D)=0.346+0.017(體重)-0.376(CYP4502C9*3+1075C/A)+0.148(VKORC1-1639A/G)-0.002(年齡)，R=0.827，R2adj=0.671。 結(jié)論： 1.我國河北地區(qū)漢族人群的CYP4502C9*3+1075C/A和VKORC1-1639A/G的基因分布頻率與歐洲等其它人群存在種族差異。 2.CYP450 2C9 *3+1075C/A和VKORC1-1