膠原多肽螯合鈣的制備及其壯骨、骨質(zhì)疏松防治作用研究.pdf

1、豬皮中含有豐富的膠原蛋白，是制備膠原多肽的優(yōu)質(zhì)原料。本實(shí)驗(yàn)以豬皮為原料，采用蛋白酶水解法制備膠原多肽并確定最佳工藝，通過(guò)與最適鈣源螯合并篩選最佳工藝制備出膠原多肽螯合鈣，以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，并以碳酸鈣和葡萄糖酸鈣兩種常規(guī)補(bǔ)鈣劑作為陽(yáng)性對(duì)照，對(duì)制得的膠原多肽螯合鈣進(jìn)行骨質(zhì)疏松的防治及壯骨作用研究。 選用豬皮為原料，采用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶水解提取膠原多肽，對(duì)影響酶作用的pH值、溫度、酶濃度、底物濃度、時(shí)間等因素進(jìn)行單因

2、素和正交試驗(yàn)，得出水解的最佳工藝條件。在此基礎(chǔ)上任選兩種酶并改變添加順序?qū)ωi皮進(jìn)行酶解，以水解度為依據(jù)得出最佳組合。結(jié)果表明：(1)中性蛋白酶水解豬皮制備膠原多肽的最適p H為6.5，最適溫度為45℃，最適酶量為0.5％，最適底物濃度為15％。堿性蛋白酶水解豬皮制備膠原多肽的最適p H值為11，最適溫度為55℃，最適酶量為0.5％，最適底物濃度為35％。木瓜蛋白酶水解豬皮制備膠原多肽的最適p H為5，最適溫度為60℃，最適酶量為0.9％

3、，最適底物濃度為30％。水解能力大小為：堿性蛋白酶>木瓜蛋白酶>中性蛋白酶。(2)通過(guò)分步酶水解試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，復(fù)合酶水解能力均高于各自單--酶水解能力，且添加順序?qū)λ舛鹊闹涤酗@著影響。以木瓜蛋白酶+堿性蛋白酶的水解效果最好。(3)對(duì)水解產(chǎn)物的分子量分析結(jié)果表明，其分子量要選遠(yuǎn)地小于膠原蛋白，證明其已被分解，且其分子量呈連續(xù)分布，大多分布在幾千到4萬(wàn)千道爾頓之間。 選用以最佳水解條件制備出的膠原多肽為原料，找出與其螯合的最佳鈣源并研

4、究制備膠原多肽螯合鈣的最佳工藝條件。結(jié)果表明，最佳鈣源為CaCl<,2>，最佳的螯合條件是pH值為8.0，肽鈣質(zhì)量比為4：1。采用有機(jī)溶劑萃取法使膠原多肽螯合鈣在有機(jī)溶劑中沉淀出來(lái)，并討論了萃取時(shí)有機(jī)溶劑的用量對(duì)產(chǎn)品得率的影響，結(jié)果得出在無(wú)水乙醇與蒸餾水體積比為9：1時(shí)產(chǎn)品得率最高。最后用紫外掃描和紅外光譜對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明該螯合產(chǎn)物不同于膠原多肽和CaCl<,2>，是一種新的物質(zhì)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)小試驗(yàn)，即治療試驗(yàn)組(