“痰壅胞宮”生物學(xué)基礎(chǔ)及其效應(yīng)（6）——基于卵巢顆粒細胞胰島素抵抗及其中藥干預(yù)機制.pdf

1、目的：通過觀察胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)抑制劑沃曼青霉素(wortmannin)誘導(dǎo)胰島素抵抗(IR)后關(guān)鍵信號葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(Glut<,4>)、絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)基因表達的調(diào)節(jié)，探討IR信號傳導(dǎo)分子機理；研究胰島素樣生長因子(IGF-I)刺激作用下對豬卵巢胰島素抵抗與正常顆粒細胞性激素生成及細胞色素芳香化酶(P450arom)、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)和類固醇激素急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)

2、mRNA的影響；中西藥胰島素增敏劑曲格列酮、二甲雙胍和小檗堿、丹參酮對IR的影響。 方法：對豬卵巢顆粒細胞進行體外培養(yǎng)，用PI-3K抑制劑wortmannin誘導(dǎo)IR模型，以氚三標(biāo)記葡萄糖檢測細胞中的糖元量，葡萄糖氧化酶法檢測細胞的葡萄糖消耗量，以化學(xué)發(fā)光法測定培養(yǎng)液中雌二醇(E<,2>)、孕酮(P)、睪酮(T)的水平，以免疫熒光對Glut4、MAPK、PPAR γ蛋白定性分析，以Western Blot對Glut4、PPAR

3、γ蛋白表達定量分析，以逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對Glut<,4>、MAPK、P450scc和StAR mRNA半定量分析，以實時熒光PCR對P450arom、PPAR γ定量分析。 結(jié)論： (1)wortmannin阻斷PI-3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生IR，關(guān)鍵信號Glut<,4>表達下降影響新陳代謝信號通路，產(chǎn)生IR，而MAPKmRNA水平升高，進而影響有絲分裂信號通路，說明卵巢中存在交替的胰島素信號通路。

4、(2)首次提出應(yīng)用通過PI-3K抑制物Wortmannin誘導(dǎo)胰島素抵抗的造模的方法，引起胰島靶組織對葡萄糖的攝取和利用減少，通過氚三標(biāo)記葡萄糖及葡萄糖氧化酶法得到驗證。 (3)IGF-1刺激了顆粒細胞P450arom、StAR、P450sccmRNA的表達，引起雌激素分泌的增加。IR以后IGF-1的干預(yù)刺激雄激素的合成和分泌，StAR、P450scc的表達明顯增加了。 (4)提出IGF-I在卵泡發(fā)育中的作用和細胞內(nèi)的信