“痰壅胞宮”的生物學(xué)基礎(chǔ)及其效應(yīng)—2基于db-db小鼠卵巢功能障礙的研究.pdf

1、目的：祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為痰濕型不孕癥的病因病機為“痰壅胞宮”，即痰濁壅塞胞宮，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為痰濁的生物學(xué)基礎(chǔ)是糖脂代謝的異常，db/db小鼠具有糖脂代謝異常，生殖功能障礙等特點，符合“痰壅胞宮”不孕癥的癥候特征，因此我們選擇db/db小鼠進行基礎(chǔ)實驗研究，探索引起痰濁患者生殖功能障礙的原因，證明“痰壅胞宮”理論的正確性，同時明確卵巢內(nèi)瘦素信號系統(tǒng)的傳導(dǎo)途徑和卵巢局部瘦素信號缺失對卵巢自身功能的影響。 方法： ①雌性B6．Cg-m

2、+/+Lepr<'db>小鼠和其同窩出生的雌性野生型C57BL/6J小鼠以1∶2的比例購買于南京大學(xué)模式動物中心，單籠飼養(yǎng)，控制飼養(yǎng)環(huán)境。于出生后12周體成熟時期對瘦素長受體缺失(LR－)的雌性B6．Cg-m+/+Lepr<'db>小鼠和其同窩出生的有完整LR的雌性野生型C57BL/6J小鼠(LR+)，進行卵巢交互移植，構(gòu)建實驗小鼠的LR基因型組合分別為A(軀體LR+，卵巢LR－)、B(軀體LR+，卵巢LR－)、C(軀體LR+，卵巢LR

3、+)、D(軀體LR－，卵巢LR+)、E(軀體LR－，卵巢LR－)共5組(n=5)。 ②每日給予B組小鼠腹腔注射鹽酸小檗堿，連續(xù)兩周，檢測各自卵巢的周期變化。 ③瘦素(1μg/g) 刺激試驗后取材，檢測全身糖脂代謝指標(biāo)和生殖激素、HE染色法檢測卵巢內(nèi)脂質(zhì)化情況及卵巢組織形態(tài)功能的變化，免疫組化法檢測卵巢內(nèi)瘦素傳導(dǎo)信號蛋白包括瘦素(ob)、瘦素長受體(ob-Rb)、Janus激酶(JAK2)、信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3 (st

4、at3)、磷酸化的stat3 (p-stat3)、活化的STAT3蛋白抑制劑(PIAS3)、細胞因子轉(zhuǎn)導(dǎo)信號抑制物3(socs3)的表達；RT-PCR法檢測瘦素長受體(ob-Rb)和socs3 mRNA的表達。 結(jié)論： 1、卵巢內(nèi)存在完整的瘦素信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，但是卵巢局部瘦素信號傳導(dǎo)缺失并不影響卵巢自身的生殖及內(nèi)分泌功能； 2、db小鼠卵巢功能障礙主要是高糖脂血癥累及生殖器官導(dǎo)致其脂質(zhì)化引起； 3、由此可見