IL-37b抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231體外侵襲和轉(zhuǎn)移能力.pdf

1、目的：IL-37b被發(fā)現(xiàn)在三種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，但其在細(xì)胞內(nèi)的作用以及是否在腫瘤組織和細(xì)胞中均表達(dá)尚未有研究報道，本研究將探討乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞內(nèi)的IL-37b對細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響，并初步分析IL-37b影響細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的分子機(jī)制。
　　方法：⑴收集2株腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7，提取總RNA和總蛋白，western blot檢測IL-37b的表達(dá)，realtime PCR檢測IL-37b的表達(dá)

2、。⑵利用pCDNA3.1構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pIL-37b，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，G418篩選陽性表達(dá)細(xì)胞株，挑取1株陽性細(xì)胞株。將篩選獲得的陽性的細(xì)胞株利用western blot和realtime PCR進(jìn)行鑒定。鑒定后的細(xì)胞株繼續(xù)大量培養(yǎng)、保種，用于后面的實(shí)驗(yàn)。⑶Transwell檢測細(xì)胞的體外侵襲及遷移能力變化，粘附實(shí)驗(yàn)檢測腫瘤細(xì)胞對整合素配體FN的粘附能力。⑷將細(xì)胞培養(yǎng)于預(yù)先包被marigel的六孔板中，培養(yǎng)48h后，

3、收集細(xì)胞與細(xì)胞培養(yǎng)上清，realtime PCR檢測細(xì)胞內(nèi)MMP9基因的表達(dá)，明膠酶譜檢測培養(yǎng)液中MMP-9的活性。⑸將細(xì)胞培養(yǎng)于6孔板中，培養(yǎng)48h后，realtime PCR檢測細(xì)胞αv、β3基因表達(dá)，western blot檢測αv、β3蛋白表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞膜表面αvβ3表達(dá)指數(shù)。⑹將細(xì)胞培養(yǎng)于六孔板中，48h后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，ELISA檢測培養(yǎng)液中IL-8、IL-6的含量。
　　結(jié)果：①IL-37b在MDA-

4、MB-231和MCF-7細(xì)胞中的表達(dá)具有顯著的差異性，較低侵襲轉(zhuǎn)移能力的MCF-7細(xì)胞內(nèi) IL-37b的表達(dá)明顯高于高侵襲轉(zhuǎn)移能力的MDA-MB-231細(xì)胞。②MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)IL-37b后，其體外侵襲及遷移能力明顯下降，對整合素配體FN的粘附能力明顯降低，與MCF-7類似。③MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)IL-37b后，能顯著的抑制細(xì)胞MMP-9的表達(dá)以及MMP-9的活性。④MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)IL-37b后，