早期立體定向血腫抽吸聯(lián)用單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂腦保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景和目的 腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是神經(jīng)系統(tǒng)的常見疾病，具有發(fā)病率高、致殘率高和死亡率高的特點(diǎn)，是影響人類生存及生活質(zhì)量的最嚴(yán)重的疾病之一。近年來開展的立體定向血腫抽吸術(shù)較傳統(tǒng)開顱手術(shù)具有操作簡單、適應(yīng)癥寬，損傷小，療效高病死率低等優(yōu)點(diǎn)，是目前治療腦出血的理想方法。但由于立體定向血腫清除術(shù)并沒有完全清除血腫，殘存的血液成分繼續(xù)造成組織損傷，某種程度上影響神經(jīng)功能恢復(fù)，因此針對腦出血

2、抽吸術(shù)后病理生理機(jī)制探討術(shù)后用藥非常有必要，但目前血腫抽吸術(shù)后藥物干預(yù)的基礎(chǔ)研究仍是空白。本實(shí)驗(yàn)詣在探討立體定向血腫抽吸術(shù)后血腫腔、腹腔聯(lián)用單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(monosialoganglioside，GM1)的腦保護(hù)作用，并比較不同途徑給藥腦保護(hù)作用的差異，從而為臨床腦出血治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 材料和方法 1.75只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分成3組：立體定向血腫抽吸組、抽吸腹腔給藥組和抽吸血腫腔給藥組。 2．

3、將IV型膠原酶0.4u(溶于1ul的生理鹽水)立體定向注入大鼠尾狀核誘導(dǎo)形成腦出血模型，10h后向血腫腔注入尿激酶3000u(溶于5ul生理鹽水)，1h后實(shí)施立體定向血腫抽吸術(shù)排出血腫。各組均于血腫部位固定留置針。 3．GM1凍干粉針劑2mg/kg(藥物容積5ul)，于抽吸后立即注入血腫腔，注藥時間5min，處死前連續(xù)給藥；腹腔給藥組：給藥劑量為20mg／kg，給藥頻率同上。 4．各組大鼠在注酶后3d斷頭取腦進(jìn)行腦組織含

4、水量測定。 5．各組大鼠在相應(yīng)的時間點(diǎn)(注酶后1d，3d，5d，7d)行大鼠神經(jīng)功能缺損評分，并斷頭取腦。 6．將取出的腦組織標(biāo)本置4％多聚甲醛(Paraformaldehyde，PFA)中室溫固定3 h，按常規(guī)脫水后石蠟包埋，制備橫斷面5μm厚度切片。 7．行GFAP、AQP4、Caspase-3免疫組織化學(xué)染色觀察血腫周圍細(xì)胞數(shù)目及蛋白表達(dá)變化。 8．采用Image-ProPlus圖象分析軟件對免疫組

5、化圖象進(jìn)行光密度分析；光鏡下3個高倍鏡視野進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)，腦組織含水量按Eliot公式計算：腦組織含水量=(濕重-千重)／濕重×100％，所有統(tǒng)計結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，用SPSS11.5醫(yī)學(xué)統(tǒng)計程序進(jìn)行單因素方差分析，通過Pearson相關(guān)分析計算caspase-3、GFAP細(xì)胞計數(shù)與神經(jīng)功能評分間的相關(guān)系數(shù)，p<0.05有統(tǒng)計學(xué)差異，p<0.01有顯著性差異。 結(jié)果： 1．單純抽吸組注酶后3d

6、AQP4陽性細(xì)胞數(shù)及蛋白表達(dá)量達(dá)高峰。 2．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，腦出血3d時腦組織含水量顯著減少(P<0.05)。 3．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，3d(p<0.05)、5d、7d的GFAP、AQP4、Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)及蛋白表達(dá)量明顯減少，尤其是5d、7d的減少更顯著(p<0.01)。 4．血腫腔、腹腔給藥組同抽吸組比較，3d(p<0.05)、5d、7d的神經(jīng)功能恢復(fù)較顯著，尤其是5d

7、和7d神經(jīng)功能恢復(fù)更顯著(p<0.01)。 5．血腫腔給藥和腹腔給藥組比較，前者3d(p<0.05)、5d、7d的GFAP、AQP4、Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)及蛋白表達(dá)量明顯減少，尤其是5d、7d的減少更明顯(p<0.01)；前者的3d(p<0.05)、5d、7d神經(jīng)功能恢復(fù)顯著，尤以5d、7d差異顯著(p<0.01)；兩組3d腦水含量減少比較無顯著性差異(p>0.05)。 6．抽吸組Caspase-3、GFAP細(xì)胞

8、計數(shù)與大鼠神經(jīng)功能評分的相關(guān)系數(shù)分別為：0.835 0.783。 結(jié)論： 1．水通道蛋白4可能參與了腦出血腦水腫形成。 2．單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂有減輕腦出血腦水腫作用，下調(diào)水通道蛋白可能是減輕腦水腫的機(jī)制之一。 3腦出血神經(jīng)功能缺損可能與細(xì)胞凋亡和反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生有關(guān)。 4．單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂有抑制腦出血細(xì)胞凋亡和反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增生作用，抑制腦出血細(xì)胞凋亡和反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞增