海膽和海參單唾液酸神經節(jié)苷脂的分離鑒定.pdf

1、海洋棘皮動物門物種現(xiàn)存超過7000多種，其體內含有多種活性成分，如皂苷、糖脂、類胡蘿卜素、萘醌等。神經節(jié)苷脂屬于鞘糖脂的一種，是棘皮動物體內一種重要生物活性成分，其分子中含有一個或一個以上唾液酸。神經節(jié)苷脂與許多生物學過程相關，并且在一些疾病尤其是中樞神經系統(tǒng)疾病病理過程中起重要作用。棘皮動物神經節(jié)苷脂的結構獨特，有很好的開發(fā)前景。
　　 本論文首先對馬糞海膽中的兩種單唾液酸神經節(jié)苷脂做了分離鑒定，并總結了單唾液酸神經節(jié)苷脂(m

2、onosialoganglioside，MSG)和硫酸酯化單唾液酸神經節(jié)苷脂(monosialoganglioside sufate，MSGS)的ESI-MS/MS質譜裂解規(guī)律。然后，利用ESI-MS/MS質譜結合所推導的裂解規(guī)律快速鑒定紫海膽、黃海膽和仿刺參中MSG和MSGS的結構，通過RPLC-MSMS技術對上述幾種棘皮動物單唾液酸神經節(jié)苷脂的分子種組成進行研究。最后建立基于質譜多重反應監(jiān)測模式測定MSG和MSGS含量的方法，依此測

3、定了10種不同海參和三種海膽中單唾液酸神經節(jié)苷脂的含量。本文內容主要包括以下三部分：
　　 1.采用硅膠柱層析、陰離子交換柱層析從馬糞海膽(Hemicentrotus pulcherrimus)生殖腺中分離得到兩種神經節(jié)苷脂化合物HPG-A和HPG-B，HPG-A進一步經半制備HPLC純化得到三個單體分子HPG-A1、HPG-A2和HPG-A3，HPG-B得到一個含量較高的單體分子HPG-B1。通過氣質聯(lián)用和核磁共振法鑒定HPG

4、-A是由Neu5Gcα2-6G1cβ1-1Cer和少量Neu5Acα2-6G1cβ1-1Cer組成的混合物；HPG-B結構為8-SO4-Neu5Gcα2-6G1cβ1-1Cer。二者的主要脂肪酸為C22:1和C22:1h，長鏈堿基為t16:0和t18:0；四種單體結構分別為Neu5Gcα2-6G1cβ1-1-t16:0-C22:1(分子量1078.7)、Neu5Gcα2-6G1cβ1-1-t18:0-C22:1(分子量1105.7)、N

5、eu5Gcα2-6G1cβ1-1-t18:0-C22:1h和8-SO4-Neu5Gcα2-6G1cβ1-1-t18:0-C22:1h。在二級質譜中，MSG的單體分子唾液酸糖苷鍵易發(fā)生斷裂，產生m/z=306.1的唾液酸碎片，同時產生兩種跨環(huán)斷裂碎片0，4A2-CO2和0，2X1-CO2，可作為判斷唾液酸α2-6連接的依據；HPG-B的單體分子不產生跨環(huán)斷裂碎片，但糖苷鍵斷裂產生的唾液酸碎片可繼續(xù)碎裂，借此可判斷硫酸酯基取代位點。

6、　　 2.對紫海膽、黃海膽和仿刺參中神經節(jié)苷脂進行分離，并利用ESI-MS質譜技術對其結構進行鑒定。兩種海膽樣品中都同時含有MSG和MSGS，其中黃海膽MSG中還含有一類特殊結構(KDNα2-6G1c1-1Cer)的分子；通過液質聯(lián)用測定各樣品中MSG的分子種組成，海膽樣品堿基主要以t16:0和t18:0為主，仿刺參樣品堿基主要以d18:1為主，海膽樣品和海參樣品脂肪酸組成無明顯差異。
　　 3.采用Svennerholm法，

7、提取10種海參和3種海膽中單唾液酸神經節(jié)苷脂和硫酸酯化單唾液酸神經節(jié)苷脂，通過三重四級桿質譜儀的多重反應監(jiān)測模式研究不同海參和海膽中兩種神經節(jié)苷脂的含量。先通過一級質譜掃描確定樣品MSG和MSGS的分子組成，然后通過二級質譜MRM模式檢測唾液酸子離子，實現(xiàn)定量分析。海膽樣品中黃海膽MSG的含量最高，約為382.4μg/100mg；紫海膽中MSGS含量最高，約為437.1μg/100mg。海參樣品中，美國紅參所含MSG含量最高為13.1μ