核仁磷酸蛋白突變對白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制初探.pdf

1、急性髓系白血病(AML)是一類造血系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病急驟，病程短，死亡率較高。傳統(tǒng)的放化療治療AML完全緩解率較低，易復(fù)發(fā)。雖然造血干細(xì)胞移植是根治AML的方法，但是存在著排異反應(yīng)、治療費(fèi)用昂貴等諸多問題。臨床資料顯示，在成人和兒童AML患者中，NPM突變均有發(fā)生，其發(fā)生率隨著年齡的增長而增加。最近發(fā)現(xiàn)，NPM突變能夠促進(jìn)正常小鼠成纖維細(xì)胞MH3T3惡性轉(zhuǎn)化，但是其對白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響還未見文獻(xiàn)報(bào)道。 本研究采用基因轉(zhuǎn)

2、染技術(shù)，以NPM無突變的CD34+白血病細(xì)胞系KG-1a為研究對象，分析突變型NPM對早期白血病細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其分子機(jī)制。主要的結(jié)果和結(jié)論如下： 1.檢測KG-1a細(xì)胞中CD34抗原和突變型NPM基因的表達(dá)。首先利用流式細(xì)胞儀(FACS)檢測KG-1a細(xì)胞中CD34+細(xì)胞含量，發(fā)現(xiàn)KG-1a細(xì)胞系中CD34+細(xì)胞比例占96.3％。然后利用RT-PCR和免疫組化分別檢測突變型NPM基因表達(dá)及其蛋白的亞細(xì)胞分布，證實(shí)了KG-

3、1a細(xì)胞是高表達(dá)CD34的早期白血病細(xì)胞，不表達(dá)突變型NPM基因和蛋白，符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。 2.轉(zhuǎn)染突變型NPM基因，觀察其對白血病細(xì)胞增殖和凋亡的影響。首先在通過脂質(zhì)體介導(dǎo)下將突變型NPM基因轉(zhuǎn)染入KG-1a細(xì)胞并篩選穩(wěn)定表達(dá)株。RT-PCR和免疫組化檢測突變NPM基因和蛋白表達(dá)情況，證明轉(zhuǎn)染后白血病細(xì)胞表達(dá)突變型NPM基因和蛋白；其次采用FACS檢測細(xì)胞周期，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞周期進(jìn)程明顯增快，同時臺盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞，顯示細(xì)

4、胞增殖能力增強(qiáng)；最后采用分光光度方法檢測細(xì)胞casepase-3的活性以判斷細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染組細(xì)胞casepase-3的活性下降，細(xì)胞凋亡減少。上述實(shí)驗(yàn)表明了突變型NPM不僅能夠促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞體外增殖，而且還賦予細(xì)胞抗凋亡的性質(zhì)。 3.初步探討突變型NPM影響白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的分子機(jī)制。首先利用RT-PCR檢測細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子p21 mRNA水平，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞p21的mRNA表達(dá)減低；然后檢測細(xì)胞ca