人蛔蟲體腔液誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞凋亡及bcl-2-bax表達(dá).pdf

1、南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文人蛔蟲體腔液誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞凋亡及bcl2bax表達(dá)姓名：吳紅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：彭衛(wèi)東20060601人蛔蟲體腔液誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞凋亡及bcl2／bax表達(dá)碩士研究生吳紅導(dǎo)師彭衛(wèi)東摘要目的：用人蛔蟲體腔液(Ascarisbodyfluid，簡(jiǎn)稱ABF)體外誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞株(A549)，觀察其是否能夠誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡及凋亡與ABF濃度和作用時(shí)間的相互關(guān)系；運(yùn)用RTPCR方法檢測(cè)靶細(xì)胞誘導(dǎo)

2、過程中bcl2／bax基因的表達(dá)變化，探討其凋亡與基因表達(dá)的相互關(guān)系。方法：1標(biāo)本采集：對(duì)新建縣昌邑小學(xué)學(xué)生進(jìn)行驅(qū)蟲治療，一次口服雙羥萘酸噻嘧啶(30mg／Kg體重)，服藥后24dx時(shí)從糞便中收集人蛔蟲成蟲。2ABF的制各：取完整的蛔蟲，經(jīng)自來水、無菌生理鹽水洗凈后，濾紙吸干，持鑷子夾住前端，使之垂直于消毒離心管上，在蟲體末端剪一小口，體液自然流出，逐條收集。收集的液體在10，000g離一530分鐘，取上清，經(jīng)045m醋酸纖維膜過濾除菌

3、，用核酸蛋白儀測(cè)蛋白含量為3370蚓ml，置一30℃儲(chǔ)藏備用。3細(xì)胞凋亡測(cè)定(腿染色)：根據(jù)MTT法細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定細(xì)胞存活率大于50％的ABF濃度作為實(shí)驗(yàn)范圍，設(shè)定ABF濃度分別為3009∥ml、1009∥ml、309∥ml、1099ml和39∥ml：ff個(gè)濃度組，誘導(dǎo)人肺上皮細(xì)胞株，分別在誘導(dǎo)后的第l、3、5、7、9小時(shí)，采用HE染色計(jì)數(shù)，測(cè)定細(xì)胞凋亡率。4DNA提取及瓊脂糖凝膠電泳：對(duì)ABF濃度為1009∥ml、誘導(dǎo)時(shí)間為5