牙周膜成纖維細胞-富血小板膠的合成及其成骨活性表達的研究.pdf

1、組織工程技術是20世紀80年代后發(fā)展起來的新技術，它為牙周組織再生提供了全新的治療方法。其基本原理是將體外培養(yǎng)的活細胞種植于細胞外基質上，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)再將這種細胞基質復合體置入機體病損部位，形成新的具有原來形態(tài)、功能的相應組織和器官從而達到修復創(chuàng)傷和重建的目的，所以構建、優(yōu)化細胞基質復合體是運用組織工程技術獲得牙周再生的先決條件。 目的：觀察富血小板膠(Platelet-Rich Plasma gel，PRP-gel)對人

2、牙周膜成纖維細胞增殖的影響；體外合成牙周膜成纖維細胞.富血小板膠(PDUFs/PRP-gel)并檢測這種基質能否表達成骨活性，從而探討PDLFs/PRP-gel作為促牙周組織再生的基質材料可行性，并對基質在不同時間表達的成骨活性進行定量指標對比，優(yōu)化選擇，從而為PDLFs/-PRPgel基質在促牙周組織再生的臨床應用中確定基質最佳植入時間提供實驗依據(jù)。 方法： 采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人牙周膜成纖維細胞(PDLs)并鑒定，取

3、第5～6代細胞用于實驗。通過二次離心法制備富血小板血漿(Platelet-Rich plasma，PRP)：以四唑鹽比色法[3-(4,5-dimethylthiaz01.2-y1).2,5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]法檢測富血小板膠對人牙周膜成纖維細胞增殖的影響。 制備PDLFs/PRP-gel(實驗組)和PRP-gel(陰性對照組)，在不同時間(4、6、8、10、11、14、15、16、

4、18、23、28d)用堿性磷酸酶(ALP)試劑盒檢測基質內(nèi)ALP含量；用免疫組化法(Envision二步法)檢測基質中骨涎蛋白(Bonesialoprotein，BSP)、骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)含量。 鈣化結節(jié)的觀察：將第5～6代PDLFs用PRP-gel緩釋液不傳代培養(yǎng)，倒置相差顯微鏡下見細胞結節(jié)狀聚集時行Von Kossa染色并記錄結節(jié)出現(xiàn)時間。 結果： (1)PRP-gel對人牙周膜成纖

5、維細胞增殖的影響： PRP-gel實驗組較對照組對人牙周膜成纖維細胞增殖作用更明顯，從第三天起有統(tǒng)計學差異。 (2)基質內(nèi)ALP含量的檢測： 實驗組6d時ALP含量明顯增高，8～10d達到峰值(平臺期)，11d后迅速下降，6～10d這三組與其他實驗組比較ALP含量的有統(tǒng)計學差異。 (3)基質內(nèi)骨涎蛋白和骨橋蛋白含量的檢測： 實驗組骨橋蛋白在15～16d時表達明顯，與其他時間的實驗組比較有統(tǒng)計學差異