富血小板纖維蛋白提取液對TNF-α刺激的人牙周膜細胞的影響.pdf

1、目的:
　　本實驗通過檢測富血小板纖維蛋白提取液（Platelet-rich fibrin extract。PRFe）對腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α。TNF-α）刺激下的人牙周膜細胞（Human Periodontal Ligament Cells。hPDLCs）成骨分化及礦化效能的影響，為富血小板纖維蛋白用于臨床牙周炎再生性相關(guān)治療提供實驗及理論依據(jù)。
　　方法:
　　實驗一：組織塊

2、法分離培養(yǎng)hPDLCs，免疫組化法鑒定細胞來源
　　實驗二：Choukroun法制取 PRFe。MTT法檢測不同體積分數(shù)的PRFe對hPDLCs增殖活性的影響以確定最適宜體積分數(shù)的PRFe用于后續(xù)實驗。
　　實驗三：PRFe對經(jīng)TNF-α刺激下的人牙周膜細胞成骨效能的影響。
　?、艑嶒灧纸M①空白對照組；②TNF-α（10ng/mL）組；③PRFe組；④PRFe+TNF-α（10ng/mL）組
　?、茐A性磷酸酶試劑

3、盒檢測各實驗組ALP活性
　?、擒缢丶t染色法觀察各實驗組細胞礦化功能
　　⑷Western Blotting法檢測各組細胞中Runx2、Osterix蛋白的含量。
　　結(jié)果:
　　1.倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)呈長梭形。牙周膜細胞波形絲蛋白染色陽性，而角蛋白14染色陰性，證實細胞為間充質(zhì)來源而非上皮性來源。
　　2. MTT法檢測不同體積分數(shù)的PRFe對 hPDLCs增殖活性的影響，結(jié)果顯示50％體積分數(shù)

4、的PRFe吸光度值高于其他實驗組（P＜0.05）。
　　3.選擇體積分數(shù)為50%的PRFe用于后續(xù)實驗，ALP活性檢測、茜素紅染色和Western Blotting結(jié)果顯示：
　　①TNF-α組各項指標均低于空白對照組（P＜0.05）
　?、赑RFe組各項指標均高于空白對照組（P＜0.05）
　　③PRFe+TNF-α組各項指標均高于TNF-α組（P＜0.05）
　?、躊RFe組各項指標均高于PRFe+TN