45247.大鼠肌肉素基因克隆、融合表達及多克隆抗體制備

1、Y9‘8二97分類號UDC密級編號學位論文大鼠肌肉素基因克隆、融合表達及多克隆抗體制備lneC10nlnganQrUSlOneXpreSSlOnO士mUSClln士rOmratand1)rel)aratlOnOtltSDOlVClOnalantlDOQV裘梁指導教師姓名：王曼瑩教授、鏖志勇耐教授江西師范大學生命科學學院：申請學位級別：碩士專業(yè)名稱：‘有機化學：，論文提交日期：2006年4月15日論文答辯丑期：2006年5月、學位授予單位

2、和日6期：江蘑師范大學2006年月答辯委貫會主席：評閱人’：二OO六年月大鼠肌肉素基因克隆、融臺表達及多克隆抗體制備摘要肌肉素是肌細胞特異分泌的多肽蛋白質，參與機體糖代謝和脂代謝。肌肉素作為一種自分泌和旁分泌因子在骨骼肌中起作用，其mRNA幾乎只在骨骼肌中表達，并受營養(yǎng)條件和激素因子尤其是胰島素的調控，在肥胖的患有胰島素抵抗的小鼠骨骼肌中，肌肉素的mRNA表達水平相對于正常小鼠較高，而肌肉素蛋白能抑制由胰島素引起的葡萄糖吸收和糖原合成，

3、由此推測肌肉素可能與糖尿病的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系。論文進行了原核表達并純化肌肉素，制各肌肉索的多克隆抗體，為深入了解刪鐘J加基因的功能及其臨床應用奠定基礎。本文從大鼠的骨骼肌中提取總RNA，用RT—Pc方法克隆到肌肉素的cDNA，將肌肉素基因片段插入含GsT標簽的融合表達載體pGEx5x一3中，構建重組質粒pGEx一5x一3一刪占口J如進行測序，測序結果與Genebank中的進行同源性比對，DNA序列的相似度為9925％，所編碼的蛋白

4、質的氨基酸序列相似度為100％將該重組質粒轉化大腸桿菌BL21(DE3)，并用I盯G誘導轉化菌表達目的蛋白，sDs—PAGE鑒定該轉化菌表達了37kDa，并用免疫印跡分析證明該蛋白為GsT～Musclin重組蛋白。經表達形式分析證明，融合蛋白小部分可溶，用GsHSepharoseResin進行純化后，免疫日本大耳白兔制備多克隆抗體，利用問接ELIsA法和westernblot檢測該重組蛋白能有效地誘導日本大耳白兔產生高水平的特異性IgG