不結球白菜抗蕪菁花葉病毒的SSR標記及非親和互作中病原相關基因的表達.pdf

1、植物病害是限制農業(yè)生產的主要因素。蕪菁花葉病毒(Turnipmosaicvirus，TuMV)作為植物的主要病原之一，在世界范圍內分布極其廣泛，對大田作物的危害僅次于黃瓜花葉病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）。TuMV是我國十字花科蔬菜的主要病原，病害的發(fā)生嚴重影響不結球白菜(Brassicacampestrisssp.chinensisMakino)的產量和品質，受到科研工作者、育種工作者和農民的廣泛關注。近年來，

2、人們在常規(guī)抗病育種、分子標記輔助育種、抗病基因克隆和病害相關生理指標的測定等方法做了大量工作，對寄主與病原相互作用的分子機理有了一定的了解。本研究以不結球白菜抗病品種‘泰三抗’和感病品種‘香青菜’為材料，篩選到一個與抗TuMV基因連鎖的SSR標記、176個病原相關基因和28個TuMV響應基因LRK01的互作基因，對于分子標記輔助育種具有一定的實用價值，對不結球白菜與TuMV互作的研究具有理論意義。
　　1.利用群體分離分析法和SS

3、R技術篩選了不結球白菜中與抗病基因連鎖的分子標記，遺傳分析表明不結球白菜對TuMV的抗性由顯性單基因控制，得到1個與抗病基因連鎖的SSR標記Ra3E05，連鎖距離為8.7cM。將該標記轉化為SCAR標記SCRa2，用F2群體對其驗證，帶型與原SSR標記表現(xiàn)一致，可用于分子標記輔助育種。
　　2.通過cDNA-AFLP技術對不結球白菜按種TuMV后基因差異表達進行了分析，得到176條差異表達基因，分析表明:(1)參與病害或防御反應的

4、基因響應TuMV系統(tǒng)性侵染;(2)抗性品種和感病品種響應TuMV侵染的主要差異在于對病原識別的時間性;(3)非親和互作與親和互作有相同的表達模式，兩種互作存在動態(tài)差異;(4)兩種互作中不結球白菜基因對TuMV的響應存在量的差異。
　　3.通過生物信息學分析和同源克隆，分離了不結球白菜LRRⅡ亞家族基因，包含6個家族成員，與擬南芥中功能已知的LRRⅡ基因高度同源。研究了這些基因的表達情況，結果表明TuMV侵染能夠誘導LRRⅡ基因的局

5、部和系統(tǒng)性表達，并且可以調控內源水楊酸(SA)的積累。外施SA可以誘導對不結球白菜感病性的抗性，可能是通過抑制TuMV復制來實現(xiàn)的。雖然TuMV誘導的SA積累不是調控基因表達的主要因子，但是它能夠激發(fā)活性氧作為一條防御途徑。
　　4.利用SMART技術和酵母雙雜交系統(tǒng)，以TuMV接種的不結球白菜葉片為材料，構建了cDNA文庫。以TuMV響應基因LRK01為探針，與文庫雜交，篩選得到28個陽性克隆，經(jīng)過測序和同源性比對，一條編碼真核