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1、蕪菁花葉病毒是十字花科作物上的一種重要病原物.該文在分析蕪菁花葉病毒NIa蛋白酶在多聚蛋白上識別位點(diǎn)基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)了新的編碼NIa蛋白酶識別位點(diǎn)的序列.同時(shí)根據(jù)蕪菁花葉病毒各株系基因組保守的非限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn),設(shè)計(jì)出多克隆位點(diǎn)序列.在此基礎(chǔ)上,將含有多克隆位點(diǎn)和編碼NIa蛋白酶識別位點(diǎn)的Adaptor通過PCR介導(dǎo)插入到蕪菁花葉病毒CDN1株系全長cDNA的NIb與CP區(qū)之間的NIa蛋白酶識別位點(diǎn)之后,將蕪菁花葉病毒CDN1株系全長c
2、DNA侵染性克隆pVIR95T改造成一個(gè)可利用的基因插入型表達(dá)載體pVIR95TM.利用DNA合成和PCR的方法得到人α-降鈣素基因相關(guān)肽的編碼序列DNA,將這段DNA插入到pVIR95TM載體的多克隆位點(diǎn)中,構(gòu)建成在病毒寄主植物中表達(dá)人降鈣素基因相關(guān)肽的表達(dá)載體pVIR95TCa.根據(jù)蕪菁花葉病毒各株系保守序列,設(shè)計(jì)引物,利用免疫捕獲RT-PCR的方法獲得蕪菁花葉病毒CHN5株系覆蓋其全長基因組94﹪的長約9.4Kb的DNA片段,并克
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