抗小麥黃花葉病毒轉(zhuǎn)基因小麥的研究.pdf

1、利用WYMV RNA1、RNA2 cDNA克隆,擴(kuò)增出外殼蛋白基因和可能與真菌傳毒有關(guān)的72kDa蛋白基因,插入植物表達(dá)載體pActl.cas,構(gòu)建成含外殼蛋白基因或72kDa蛋白基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體.外殼蛋白基因與位于同一載體上的除草劑基因,72kDa蛋白基因與位于其他載體上的外源基因(包括選擇壓力基因NPTII基因)通過基因槍法對(duì)小麥幼胚進(jìn)行轉(zhuǎn)化.在轉(zhuǎn)化體系建立與優(yōu)化的過程中,對(duì)分化階段激素的使用、轟擊用微彈的制備、庶糖在轉(zhuǎn)化體系

2、中的應(yīng)用、多質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)化的共整合頻率等進(jìn)行了探討.其中,高滲培養(yǎng)階段用0.4M的蔗糖(相當(dāng)于12﹪)代替同摩爾濃度的甘露醇、恢復(fù)培養(yǎng)階段采用6﹪蔗糖溶液.該方法方便有效,可以提高分化率和轉(zhuǎn)化效率(該實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)化效率達(dá)到2.1﹪).采用PCR、PCR-RFLP的方法檢測(cè)T<,0>、T<,1>代植株中是否含有外殼蛋白基因或72kDa蛋白基因.PCR(PCR-RFLP)表現(xiàn)陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因植株種子播于小麥黃花葉病重病田,進(jìn)行田間抗病性檢測(cè).結(jié)果表明