家蠶桿狀病毒表面展示豬瘟病毒E0、E2蛋白及各自免疫原性分析.pdf

1、豬瘟(Classical swine fever,CSF)是當(dāng)今威脅養(yǎng)豬業(yè)的一個(gè)重要因素,而豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)是導(dǎo)致豬瘟的唯一因素,因而制造針對豬瘟病毒的新型疫苗具有重要的實(shí)用價(jià)值。豬瘟病毒有兩個(gè)重要結(jié)構(gòu)蛋白:囊膜蛋白E0和E2,是豬瘟病毒的主要保護(hù)性抗原,能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體,在豬瘟病毒的傳播中具有關(guān)鍵性作用。因而,這兩個(gè)蛋白可作為制造新型疫苗的抗原靶。
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2、蠶桿狀病毒表面展示技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新型的真核表達(dá)外源蛋白的方法。將外源基因與BmNPV GP64基因融合表達(dá)可產(chǎn)生表面展示外源蛋白的病毒粒子。將該病毒粒子純化,即可作為免疫原對動物進(jìn)行保護(hù)性免疫,此方法可簡化疫苗生產(chǎn)的純化工藝。利用家蠶蛹作為生物反應(yīng)器可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn),降低疫苗制備的成本。
　　 本研究通過克隆豬瘟病毒E0基因和E2基因,將兩基因分別構(gòu)建到原核表達(dá)載體上,在大腸桿菌中表達(dá)目的蛋白,并制備出多克隆抗體。同

3、時(shí)將兩基因分別插入到經(jīng)過改造的pFastBac1質(zhì)粒的GP64信號肽(SP)和跨膜區(qū)(TM)之間,成功構(gòu)建重組pFastBac1-SP-E0-TM質(zhì)粒和pFastBac1-SP-E2-TM質(zhì)粒,利用Bac-to-Bac轉(zhuǎn)座重組獲得重組桿狀病毒BmNPV-E0和BmNPV-E2。將這兩種病毒以中等感染復(fù)數(shù)接種家蠶蛹制備并純化重組病毒粒子,而后免疫Balb/c小鼠制備血清抗體,通過ELISA檢測抗體效價(jià)可達(dá)到1:800(BmNPV-E0)和